铜绿假单胞菌1.pdfVIP

编 码 SOP-UIS 07 00 山东聊城阿华制药有限公司标准操作程序 起 草 人 日 期 检验 SOP 审 核 人 日 期 控制菌检查 批 准 人 日 期 铜绿假单胞菌 实 施日 期 版 次 01 1．简 述 铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa），习称绿脓杆菌，为假单胞菌属菌种，广泛分布 在土壤，水及空气中，故可通过环境和生产的各个环节污染药品，本菌是常见的化脓性感 染菌，由于本菌对许多抗菌药物具有天然的耐药性， 国内外药典均将铜绿假单胞菌列为检 查项目之一。 铜绿假单胞菌按增菌，分离、纯培养、革兰染色、镜检及生化试验等步骤进行检验。 2. 仪器、设备和用具（见大肠埃希菌 2 ） 3. 试液、指示液 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液。 3.2 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液。 3.3 1%盐酸二甲基对苯二胺试液。 3.4 盐酸试液 3.5 氯仿（三氯甲烷） 4.培养基 4.1 营养肉汤培养基。 4.2 胆盐乳糖 (BL) 培养基。 4.3 营养琼脂培养基。 4.4 溴代十六烷基三甲胺。 4.5 绿脓菌素测定用培养基 (PDP 琼脂 )。 4.6 明胶培养基。 4.7 硝酸盐胨水培养基。 5.对照用菌液 铜绿假单胞菌 [CMCC （B ）10104]营养琼脂斜面培养物少许，接种至 5ml 营养肉汤培养基内， 6 于 36℃± 1℃培养 18~24h 后，用 0.9%无菌氯化钠溶液稀释至 1:10 ，使对照菌加入量含 10~100cfu/0.1ml，菌数测定在做阳性对照实验的同时用营养琼脂浇碟或平板涂布经培养后计 数确定。 6.操作方法 6.1 供试品的取样量（见细菌、霉菌和酵母菌计数 5.3 ）。 6.2 供试液的制备： （见细菌、霉菌和酵母菌计数 7 ）；（大肠埃希菌 6.2）。 6.3 增菌培养 取胆盐乳糖培养基 2 份，每份 100 ml，1 份加入 1：10 供试液 10ml （相当于供试品 1g 或 1ml ）。 另 1 份加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照。于 36℃± 1℃培养 18~24h （必要时可延至 48 h）。阴性对照菌应无菌生长。 6.4 分离培养 轻轻摇动上述增菌培养液， 以接种环沾取 1~2 环培养液 （如有菌膜应挑取之），划线接种于溴 代十六烷基三甲胺琼脂平板，于 36℃±1℃培养 18~24h。铜绿假单胞菌在该培养基平板上的 典型菌落为扁平、圆形或无定形、边缘不齐，光滑湿润，呈灰白色，周边略呈扩散现象，在 菌落相邻处常有融合现象。菌落周围常有水溶性蓝绿色素扩散，使培养基显蓝绿色，但亦有 不产色素的菌株。菌落还有粗糙型和粘液型等，应注意挑选。 6.5 纯培养 供试品分离平板生长 6.4 所述典型菌落或呈疑似菌落时，以接种针轻轻接触单个菌落的表面 中心，沾取培养物，应挑取 2~3 个疑似菌落，分别接种营养琼脂斜面，培养，作以下检查。 6.6 革兰染色镜检 (见 SOP-UIS 08 00) 6.6.1 革兰染色。 6.6.2 镜检结果。 铜绿假单胞菌为革半阴性、无芽孢杆菌，单个，成对或成短链排列。 6.7 生化试验 用铜绿假单胞菌 [CMCC （B ）10104]做生化试验的阳性对照株。