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细胞培养标准操作程序 （SOP） 1．目的 ： 为了保证培养细胞的正常生长， 实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤， 特制订 实验室细胞培养操作流程。 2．适用范围： 适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。 3．操作规程： 培养液、 PBS、胰蛋白酶的配制 1000ml 培养液的配制 1、准备用品：培养粉、 1000ml 烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、 PH仪、 2 ～3 天内的新鲜三蒸水 （或新鲜反渗水）、 NaHCO3粉、 1000ml 无菌玻璃瓶（ 100ml×10 个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、 2 ～ 3 个过 滤器、注射器。紫外线照台 30min 。 2、将培养粉用 900ml 新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。 3、充分搅拌，按说明添加成分（如 Invitrogen 公司的 RPMI-1640 配制 1000ml 需加 NaHCO3粉， Invitrogen 公司的 DMEM需加 NaHCO3粉等），再充分搅拌。无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。 4、用 1M （1mol/L ）HCl 调 PH至左右（细胞适宜在～生长，配制好后 PH值会升高～，故配时调 PH 至左右）。 5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到 1000ml。 6、配青霉素 80 万/ 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 配链霉素 100 万/ 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 取青霉素和链霉素加入到 1000ml 培养液中，使其终浓度均为 100U/ml ，充分搅拌混匀。 7、在无菌操作台里用的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到 100ml 玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄 膜封口，盖上橡皮塞，放 -20 ℃保存备用。 注意： （1）配制培养液及调节培养液 PH值所使用的 HCl 和（或） NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。 一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。 （2 ）准备的 100ml×10 个玻璃瓶必须事先高压灭菌 ！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗 水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。 PBS （平衡盐溶液）的配制 NaCl 8g KCl ＋新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至 1000ml 2 Na2HPO4*HO KH2PO4 （1） 无需调 PH值，其成分溶解后 PH为，不需除菌滤膜过滤除菌，放于 4℃保存，用前直接高压灭菌 （高压时，装 PBS的瓶子的瓶盖要插针头 ! ） （2 ） Na2HPO4*H2O 则 Na2HPO4*12 H2O需 （3） 如欲配制 500ml ，以上成分减半即可 %胰蛋白酶的配制 胰蛋白酶粉 EDTA （乙二胺四乙酸二钠） NaCl KCl ` + 新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至 1000ML NaHCO3 Glucose( 葡萄糖 ) 酚红 （1）配出来的 PH值为，在 PH值～范围内，故不需调 PH值。 （2 ）用的除菌滤膜过滤分装，瓶口用薄膜封口，放 -20 ℃保存备用。 4℃可连续使用 1 月左右。 （3 ）用于分装的玻璃瓶必须事先高压灭菌！而烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器 均不需高压灭菌，干净即可。 （4 ）如欲配制 500ml，以上成分