细胞培养考试题目.pdfVIP

细胞培养特性： 分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞） 体外培养细胞生长特点： 贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。 原代培养（原代细胞） ：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养 或原代细胞。 传代培养： 细胞持续生长繁殖一段时间， 到达一定浓度之后， 就应当将细胞分离成两部分 （或 更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。 细胞系： 原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。 有限细胞系： 一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。 无限细胞系： 传代中极少的后代发生转化，通过“危机期” ，获得不死性而具有持久或无 限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。 细胞株： 通过选择法或克隆形成法， 从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的 培养物称为细胞株。 克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始， 其在体外无性繁殖成新的基因 型相同的细胞群体， 这种纯化的细胞群称为细胞株， 他们中的每个细胞的遗传特征及生物特 性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。 杂交瘤技术： 主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制 备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。 杂交瘤： 由产生抗体的肿瘤细胞与抗原 - 刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产 生的抗体称为 单克隆抗体 。基本原理 是用分泌抗体但不能长期培养的 B 细胞与能在体外长期 培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。 筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤 细胞的特性，可长期传代培养， 又可在液氮中保存的细胞。把这些细胞单克隆化， 用单克隆 化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。 细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成 一个双核或多核细胞的过程。 杂交技术过程 : ①免疫动物及细胞培养 : 用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体 B 淋巴细胞 , 利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合 , 获得既 有分泌抗体能力 , 又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞 ( 在具有筛选作用的培养基上 培养 ) ③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定 ( 动物体内诱生法和体外培养法 ) ⑤进一 步分离和纯化单克隆抗体 , 鉴定单克隆抗体类型及亚类 , 测定抗体亲和力以及相应抗原的分 子量等 . 显微镜的分辨率 是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ = λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长； NA 为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由 物镜的 NA值与照明光源的波长两个因素决定。 NA值越大， 照明光线波长越短， 则σ值越小， 分辨率就越高。要提高分辨率，即减小σ值， 提高分辨率可采取以下措施 : （1）降低波长λ值，使用短波长光源。 （2 ）增大介质 n 值以提高 NA 值（ NA=nsin(u)/2 ）。 （3 ）增大孔径角 u 值以提高 NA值。 （4 ）增加明暗反差。 体外培养过程： 原代培养或初代培养、传代期、衰老期。 每代细胞生长过程： 滞留期（潜伏期） 、指数生长期、平台期 培养细胞生长条件： ①营养需要： 基本营养物质 （氨基酸、维生素、 碳水化合物及无机离子） 和促生长因子等物质。②生存环境：温度（ 35—