巴马猪减压病模型研究及应用.pdfVIP

巴马猪减压病模型研究及应用 随着我国海上战略指导思想的转变,尤其是对海洋资源的开发和海洋权益的 维护,推动海军战略从“近海防御”向“远海防卫”转变,海上各类军事行动日益 频繁。军事潜水打捞、水下特种作战和潜艇脱险等水下活动都极有可能发生减压 病(decompression sickness,DCS)。 此外休闲潜水人数迅速增长,水下和高气压工程作业量陡增,这些人群都面 临着极大的DCS 风险。相对于普通临床疾病,DCS 的病例数量有限。 探索它的发生机制、病理生理过程和防治措施,更依赖于实验动物模型。小 鼠、大鼠等小型实验动物在DCS 研究中被广泛运用。 但因生理构造与人类差别较大,在深入观察防治措施效果、探索特殊机制或 者在新技术应用于人体前,需要借助大动物模型。在非灵长类动物中,猪在基因水 平、解剖结构和生理特征上与人类较为相近,特别是心血管系统、呼吸系统、皮 肤组织和脊髓等与DCS 发生密切相关的系统。 然而相对小鼠、大鼠等动物, 目前以猪作为DCS 模型较少,尤其国内在此领域 更是空白。巴马猪是我国人工培育的唯一实验用小型猪,遗传背景明确,生理指标 稳定、重现性好,是建立DCS 模型理想的动物。 本课题旨在系统地研究巴马猪DCS 模型,优选制备稳定发病率的高气压暴露 方案,建立评估指标体系;探究DCS 核心病理生理变化——炎症反应和内皮损伤 的规律;研究猪作为DCS 模型特征性表现——DCS 皮肤损伤的临床症状和机制;研 究DCS 核心致病因素——气泡在体内的变化规律以及与各指标变化、症状演变的 相关性。模型的价值不仅体现在对疾病本身的机制探索,也包括运用于疾病防治 方法的研究。 本课题的第二部分针对不同的干预措施,选用不同DCS 严重程度的高气压暴 露方案;并针对干预措施的作用机制,从评估体系中选取合适的评价指标,同时不 断完善模型本身的研究。高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)是治疗DCS 最有效的 方法,而作为预处理措施的研究, 目前尚停留在小动物模型中。 七叶皂苷素作为内皮保护剂在临床广泛应用于治疗慢性静脉功能不全、软组 织水肿、痔疮等疾病。本课题组已在大鼠模型上证实了两者对DCS 具有良好的防 治效果,本课题基于巴马猪DCS 模型进一步探索HBO 预处理和七叶皂苷素对DCS 的效应及机制,为未来推广到DCS 的防治实践中提供理论依据。 第一部分:巴马猪DCS 模型的研究一、巴马猪DCS 模型的建立研究方法:选用 雄性阉割巴马猪分别接受不同深度、暴露时间和减压速度的高气压暴露方案处理。 减压后在既定时间点检测评估肢体运动功能和脊髓诱发电位,两者联合确定DCS 脊髓损伤;心脏超声评估右心气泡量和心肺功能;观察皮肤症状演变;检测血液理 化指标。 通过整体行为学、组织病理学、循环和神经生理学、气泡生成、炎症反应等 方面筛选建立评估指标体系。研究结果:各暴露方案产生不同发病率和死亡率的 DCS 模型。 减压后右心系统可见明显气泡,肺动脉瓣口血流减慢,跨瓣压减小;出现典型 皮肤损伤;白细胞、血小板数量减少,D-二聚体和纤维蛋白原降解产物增高,凝血 酶原时间延长;肺、脊髓发生淤血、出血等病理改变。结论:成功建立了稳定发病 率和死亡率的巴马猪DCS 模型,上述各类指标能够客观反应模型损伤程度。 二、巴马猪DCS 炎症因子和内皮损伤的时间变化规律研究方法:10头巴马猪 分两组分别接受“30 msw(meter sea water)暴露120 min、6 min减压”和“40 msw 暴露35 min、11 min减压”的高气压暴露处理。使用超声检测动物气泡量, 按照既定时间点采血检测炎症因子白介素-1β (interleukin-1β ,IL-1β )、白介 素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化因子-1(monocyt chemo-attractant protein-1,MCP-1)水平,以及内皮标志物内皮素 -1(endothelin-1,ET-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)水平,观察两类指标的变化规律和气泡量的相关性。 研究结果:气泡在减压后第一检测时间点30 min 即为峰值,6 h 仍有少量气 泡,方案一气泡量水平高于方案二。减压导