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pH值对绿色木霉(Trichoderma viride)产纤维素酶的影响 第3 8卷第 5期 20 0 8年 1 O月 工 业 微 生 物 Vo 8 No 5 l3 . Oc .2 0 t 08 I d sra i o ilg n u ti M c b oo y l r p值对绿色木霉 ( rco emavrd )纤维素酶的影响 H T i d r iie产 h耿冰，郭美锦，张嗣良，王永红，储炬，庄英萍 (东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，海 2 0 3 )华上 0 2 7 摘 要 采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源，对绿色木霉 ( r￣ Ti c vr e在摇瓶发酵过程中 id ) i 控制与不控制 p产纤维素酶进行比较。控制 p时胞外蛋白浓度为 07 gn比不控制 p时提 H H .2m/￣ H高4%; AE C 3 H)、 G、 B和 C H酶活为 1 .u/ L,2 .U/,.5 m 0 8 U/ L分别是不控制 p B 50 m 10 0 mL 17 U/ L,.5 m H 时的 2 1231. .、.、17和 17。在不同 p下测定纤维素酶液各酶活，明 p .倍 H表 H值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在 p 2 7时， H .葡萄糖苷酶酶活仅为 p 4 8时酶活的 4 p回调试验结果表明葡萄糖 H .%;H 苷酶对 p H敏感，并在催化功能上发生不可逆变化。对纤维素酶液添加分离得到的各单酶，当添加 p葡萄糖苷酶时最多可以提高 m酶活 2%。因此葡萄糖苷酶是影响综合酶活的关键酶。通过拉 0 曼光谱检测出葡萄糖苷酶在 p 5 0有活性状态下， H.酶蛋白主链结构主要为 a螺旋和无规则卷曲； -在p 2 0没有活性状态下， H .酶蛋白主链结构的无规则卷曲发生较大变化，旋也受到一定影响。这说 螺 明 p对葡萄糖苷酶构象的改变是造成其活性变化的主要原因。 H 关键词：葡萄糖苷酶；拉曼光谱； p控制；纤维素酶 一 H 纤维素酶的产生菌主要有木霉、青霉和曲霉等， 量摇瓶发酵试验中，现发酵过程 p的降低与菌发 H体浓度 ( MV) I葡萄糖苷酶活 ( B酶活 )变化 P及 3一 C )密切相关。有文献报道，发酵过程控制 p可以如 H 其中绿色木霉 ( r kdr avr e被认为是最好 T i oem id ) c i的纤维素酶产生菌之一，产生的纤维素酶系比例其适当，以有效地酶解纤维素类物 质。真菌纤维素可 调解菌体产酶【; 8通过添加缓冲液控制发酵过程 p H值在 6 0左右，以提高 j萄糖苷酶酶活 .可 3一葡。 本实验室分离得到了 C H、 G和 C B E B酶单组分， 这为分析发酵过程限制性酶提供了可能。为此，本文通过 p控制发酵，酶添加试验和拉曼光谱， H单对 酶系降解纤维素被认为是内切葡聚糖酶 (noJ1 ed――, 34g cn s, G, C 3 2 1 4,切纤维素酶 ( x- -l a ae E E . . . )外 u eo t14gua ae C H, C . . . 4和 j葡萄糖苷 3,-lcn s, B E 3 2 1 9 ) 3 -一酶 (―,-lcs aeC E . . . 1协同作用的 81 4guoi s, B, C 3 2 1 2 ) d结果引。内切一外切协同性 (n oeosn ri ’ e d―x - egs y m)一 p H值影响绿色木霉 ( r hdr iie发酵产 J T i oemavrd ) c 3一葡萄糖苷酶 ( B)和纤维素总酶活进行研究，步 C初分析其影响机理。 般认为是一种酶反应的顺序机理 _ 3。纤维素 酶系对纤维素的降解过程是个复杂的多酶反应过程，反应不仅有多酶的吸附、离、涉及到底物、其解还多种产物的抑制 (主要是纤维二糖，萄糖 )葡。因 1材料与方法1 1菌种 . 此对纤维素酶解过程进行调节和控制相当困难，发 酵得到的纤维素酶活普遍不高。由于纤维素酶是诱导酶，培养过程中存在葡在萄糖阻遏作用和碳源的诱导性影响， 7 同时发酵过程培养条件如 p温度、拌、气等多种因素影 H、搅通响，也造成纤维素酶发酵水平不高。本实验室在大基金项目：市科委重大专项 ( 5 1 3 6。上海 0 DZ 92 ) 绿色木霉 ( r hd r avr e, T i o em i d )本实验室保藏 c i1 2试验仪器 . 酶标仪 ( h m lsa T e oMut k nMK3, H摇床 ( i