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国内溶菌酶应用及发展陈邱 国内溶菌酶应用及发展陈邱 PAGE / NUMPAGES 国内溶菌酶应用及发展陈邱 国的溶菌酶的应用与发展 溶菌酶 ,又称胞壁质酶。球蛋白 G、N - 乙酰胞壁质聚糖水解酶。最早对溶菌酶的研究起于 N icolle 1907 年发布的枯草芽孢杆菌中的溶解子 ,1922 年 Flem ing 等发现 ,在人的唾液、眼泪中存在有能够溶解细胞壁杀死细菌的酶 ,因此被命名为溶菌酶 [1] 。1965 年,英国的菲利普等用 X 衍射法对溶菌酶进行研究剖析 ,第一个完整弄清了溶菌酶的立体结构 [ 2 ]。此后代们发现溶菌酶宽泛地存在于高等动物组织及分泌物，植物及各样微生物中 ,此中在新鲜的鸡蛋清中含量最高。溶 菌酶可选择性地分解微生物细胞壁的同时不损坏其余组织 ,且自己无毒无害 ,因此它是一种天然的安全性能很好的杀菌剂 ,防腐剂 ,将可应用于食品防腐、医药制剂 日用化工等行业。在我国 ,溶菌酶的应用围和应用量还比较有限 ,但能够估计，溶菌将会是应用于我国食品工业中一种重要的功能性食品增添剂。 溶菌酶的结构特色和抗菌作用体制结构特色与复杂性 大部分鸡蛋清溶菌酶是由 129 个氨基酸构成的碱性球状蛋白 ,相对分子量在 14000 ～18000 。其等电点可达 10 7,存在 4 个二硫键。正常条件下溶菌酶作用的最适温度为 45℃～ 50 ℃。蛋清溶菌酶 在低温干燥下可长久保留。其纯品为白色粉末状结晶 ,无臭、味甜 , 易溶于低浓度的食盐水。在碱性条件下易被损坏 ,但在酸性溶液中其化学性质稳固 ,热稳固性很强 ,在 pH4 ～ 7 时,100℃下办理 1m in 酶仍保持优秀的活性 ,在 pH3 时,100℃加热办理 45m in 还能保持活性 {3}。溶菌酶在水溶液中 6215 ℃下 ,保持 30min 则完整失活 ,在 201 5%的乙醇中 ,在 6215 ℃下保持 20m in 而不失活 [4]。王玮等 [5] 研究 表示。在一元醇和二元醇溶液中溶菌酶分子的稳固性均跟着醇浓度的 增大而提升。人溶菌酶分子量为 14600,由 130 个氨基酸构成 ,也存在 4 个二硫键 ,其酶活性比鸡蛋清溶菌酶高 2 倍左右。在生产或应用溶菌 酶时 ,因为工艺或环境的变化 ,极易造成酶的变性失活 ,所以一定采纳一 定的手段使蛋白复性，减少损失。史晋辉等 [7]研究发现 ,当酶浓度较 低时 ,017mol/L 的盐酸胍即可使溶菌酶完整复性。 别的 , 溶菌酶和其 它酶拥有相像的性质 , Karupp iah 等[8]研究表示 ,向复性溶液中加入 适当的β- 环糊精 ,可使变性的碳酸脱水酶的复性率达到 80% 。董晓燕 等[9] 利用β- 环糊精和十六烷基三甲基溴化的联合作用 ,在适合盐酸胍 浓度下 ,溶菌酶可完整复性。王彦等利用离子互换色谱法研究发现 ,当复性缓冲液中不含其余盐类时 ,脲浓度为 210mol/L 时复性产率最高 , 当脲浓度高时 ,硫酸铵能很好地提升溶菌酶的复性回收率。 溶菌酶的抗菌作用体制 目前已知的几种溶菌酶有 :- N - 乙酰己糖胺酶、酰胺酶β -1,3 、β-1,6葡聚糖酶和甘露聚糖酶、几丁质酶、磷酸甘露糖酶脱、乙酰壳多糖酶[11]。参加细菌细胞壁溶解作用的溶菌酶大概可分为作用于糖苷键和作用于肽和酰胺部分的两类。 - N - 乙酰己糖胺酶、β- 1, 3 、β 1, 6 葡聚糖酶等主要作用于糖苷键 ,使糖苷键断裂 ,损坏细胞壁的分子结构 , 而酰胺酶等则主要作用于多肽 ,使多肽断裂。以 - N - 乙酰己糖胺酶 为例 ,- N- 乙酰己糖胺酶能够催化水解细胞壁肽聚糖分子中的 N- 乙 酰胞壁酸 (NAM ) 与 N- 乙酰葡萄糖氨 (NAG)之间的β- 1, 4 糖苷键 ,使 肽聚糖分子发生断裂 ,使细胞壁外双侧浸透压失衡 ,造成细胞破碎 ,致使 微生物因细胞壁溶解而被杀死 [12]氏阳性菌因为二者细胞壁中肽聚糖 含量不一样而存在差异 ,G+细胞壁含 80%肽聚糖 ,而 G- 细胞壁只有在壁 层含有少许肽聚糖。 结晶法是传统的提取溶菌酶的方法 ,此方法原料易得 ,制备过程不是很 烦杂。起初 M ayerAbraham 等研究并利用此法 ,于 1937 年获取结晶 状物质 [13],1945 年 A lderton 等提出直接结晶法制备溶菌酶的方法[14]。景芝等 [15]对传统结晶法做出了改良 ,经过调整透析液 pH 值 , 加入磷酸盐 ,再调整其 pH 值,而后离心去除杂质获取纯化液 ,使产率提 高,活性增添。 离子互换层析法 离子互换层析法是依据各样蛋白质所带电荷数的不一样而与离子互换 剂之间结协力的差异 ,从而将不一样蛋白质分别的技术。该法应用于溶 菌酶分别始于 80 年月 ,因为