HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量PowerPoi.pptxVIP

HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量 戴云坚 殷炜铭 邵加安 陈铁刚背景阿司匹林是一非甾体类解热镇痛、抗炎、抗风湿药物。在其生产过程中乙酰化不完全或储藏过程中水解产生的水杨酸对人体有毒性.因此有必要对阿司匹林中的水杨酸进行限量和含量的测定。《中国药典》一直沿用对照品化学反应目视比色法判断结果，此方法当对照品溶液与供试品溶液颜色相近时易造成判定误差。此次实验设计HPLC法检查阿司匹林中的水杨酸。实验仪器及试药仪器 agilent高效液相色谱仪,岛津LC-10A(单泵)高效液相色谱仪；量筒,移液管，容量瓶。试药 阿司匹林样品、 水杨酸对照品、冰醋酸、无水甲醇、超纯水。实验方法色谱条件 色谱柱：C18色谱柱（4.6X150mm）；流动相：1%冰醋酸-甲醇(50：50)(组1),甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(组2) ；检测波长：300nm；流速：0.8ml·min-1；柱温：室温 溶液的配制100mL量瓶水杨酸对照品溶液：水杨酸对照品0．1g100mL量瓶取此液1.0ml10μg/mol100mL量瓶阿司匹林样品溶液：阿司匹林对照品0.1g1mg/moL组1: 1%冰醋酸-甲醇(50：50)组2: 冰醋酸：甲醇（1：10）系统适应性 水杨酸及阿司匹林的高效液相分离图谱及保留时间的确定: 分别取水杨酸对照品溶液、阿司匹林供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。组1组2最低检出限试验(组1)精密吸取水杨酸对照品溶液，用流动相逐级进行稀释。当记录的色谱图中信噪比为10：1时。确定水杨酸的定量限，信噪比为3：1时确定检测限。噪音信号为2.1ng/ml，检测限为6.3ng/ml。水杨酸精密度试验　按溶液配置中的方法配置水杨酸对照品溶液，从溶液配置到进样，重复6次，计算水杨酸峰积分面积的相对标准差（RSD≤5%）。组１：水杨酸精密度试验结果表 进样 浓度（μg/ml） 峰面积峰面积/浓度平均（峰面积/浓度） RSD（%） 19.84352.2593435.8035.3650.82 29.89352.2522635.62 310.05352.8393235.12 410.05352.6987635.09 510.07352.6452035.20 69.97352.5516435.36组２：水杨酸精密度试验结果表 进样 峰面积峰面积/浓度平均（峰面积/浓度） RSD（%） 1801746.880174.6880515.80.38 2802056.180205.61 3807673.380767.33 4804326.780432.67 5805846.980584.69 6809299.380929.93水杨酸的线性试验配制不同浓度的水杨酸溶液作为标准溶液。各取20μl依次注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得水杨酸回归方程。组１：4、6、10 、 16 、 20μg/ml组２：1.5 、 3 、 6 、 9 、 15 、 24 、 30μg/ml组1组2回收率试验加入阿司匹林50mg（组１）／100mg(组２）100ml量瓶①0.5mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/5.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液稀释②1.0mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/15.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液③1.5mL浓度为1mg/mL的水杨酸溶液/25.0ml浓度为10ug/mL的水杨酸溶液进样20μl计算平均回收率组１：回收率试验结果组别加入阿司匹林量（mg）加入水杨酸量(mg) 水杨酸理论总加入量(mg)实际所测水杨酸量(g)回收率(%)149.50.49650.713310.6570092.1251.00.9931.2163818349.61.48951.7067515组２：回收率试验结果加入阿司匹林量(mg)样品含水杨酸量(mg)加入水杨酸量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)104.70.0937070.050.154245 107.33 105.471.49108.20.0968390.050.155000 105.56 101.60.0909320.150.257745 106.98 104.40.0934380.150.256579 105.40 104.30.0933490.250.358701 104.47 103.50.0926330.250.353236 103.09 稳定性试验 配制阿司匹林供试品溶液，分别在0、7、14、21、28、35 、 42分钟时依法测定。得水杨酸一组峰积分面积，观察峰面积的变化率，得到试验溶液的稳定时间范围。组１：稳定性试验结果表时间（min）0714212835峰面积119.46167.03