乙肝病毒的检测.ppt

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乙肝病毒的检测 2020/11/4 * HBV 的三种形态 1,Hepatitis B virion(Dane particle) 2,secreted filament 3,secreted sphere 6 2020/11/4 * 乙型肝炎病毒HBV HBV是嗜肝脱氧核糖核酸病毒科的哺乳动物属的一员。 HBV阳性的血清中有三种病毒颗粒. 1.大球形颗粒,完整的HBV颗粒直径为42nm,又名Dane颗粒,分为包膜与核心的两部分,外衣壳及包膜含有表面抗原,衣壳内为核心结构,有核心抗原,核心抗原下面藏有e抗原。 2020/11/4 * 2.小球形颗粒,阳性血清中最多的颗粒,主要为表面抗原,不含核酸及DNA成分,为不完整的HBV. 3.管形颗粒,实际上是一串小球形颗粒聚合在一起的,也含有表面抗原. 2020/11/4 * * 生物化学检测 1 HBV血清标志物的检测 2 HBV 分子生物学诊断 3 HBV临床药物疗效检测 4 HBV感染的实验室检查 2020/11/4 * 1.乙型肝炎的生物化学检测 主要指标: ALT, AST, ASTm, 血清白蛋白, 血清胆红素, 胆碱酯酶, 甲胎蛋白, 凝血酶原时间(PT)及部分凝血因子; * 2020/11/4 * 方法学 ELISA:灵敏性高,成本低,适用于普通病人筛查; 胶体金免疫层析法(金标法):简便易行,可用于急诊病人快速检测; 化学发光法定量检测:价格昂贵,可用于HBVMs为临界值的病人的确证;可间接反映宿主HBV的复制水平,在评价抗病毒治疗的病毒学应答、疗效和判断预后方面有重要意义。 新增检测指标 Pre–S1、Pre–S2及其相应抗体 对乙肝两对半认识 * 2. HBV 血清标志物检测 2020/11/4 * * Pre–S1检测的临床价值 前S1蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上,在HBV感染宿主细胞 过程及在病毒复制和刺激机体产生免疫反应中起重要作用; 前S1抗原与HBeAg之间有高度相关性,并可区别因变异种及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假阴性,可作为HBeAg假阴性补充,从而准确反映患者体内病毒复制情况; 可作为HBV感染及复制的标注,与其它血清标志物联合检测,相互补充。 Back 2020/11/4 * 乙型肝炎的两对半 1.乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb), 2.e抗原(HBeAg)和e抗体(HBeAb), 3.核心抗原(HBcAg)和核心抗体(HBcAb) 这三对 乙肝病毒的抗原和抗体。 由于HBcAg主要存在于受感染的肝细胞及乙肝病毒颗粒的核心内,一般血清中较难检测到,只有用特殊的方法处理后才能查到,所以通常只能检测到HBcAb,也就是说这第三对通常只能检测到半对,所以称之为"两对半"。"两对半"是乙肝病毒最常用的血清学标记。 2020/11/4 * 乙肝五项的32种组合 2020/11/4 * 2020/11/4 * 2020/11/4 * * 大三阳 小三阳 vs 2020/11/4 * * HBV DNA 定量检测 病毒复制水平最可靠,最直接的证据,与传染性和疾病进展密切相关; 主要用于HBV感染的判断,治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。 HBV基因分型 基因分型的必要性; 基因分型的主要方法; HBV耐药突变的检测 3.HBV 分子生物学诊断 2020/11/4 * 病毒基因突变 疾病进展 临床表现 对干扰素应答 耐药变异 生化学改善 HBeAg血清学转换 HBV DNA清除 急性乙型肝炎 慢性乙型肝炎 肝硬化 (LC) 肝细胞癌 (HCC) * HBV基因型/基因亚型 2020/11/4 * 分型方法 优缺点 序列测定法 最直接,最可信,是HBV基因分型的金标准,但繁琐费时而且价格昂贵,混合型检测能力差,不适于大样本检测。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法 (PCR-RFLP) 较测序法简便,适于大样本检测,但由于需要进行酶切,所以操作仍较为繁琐,成本较高,并存在酶切不彻底等问题。 pre-S2单克隆抗体酶联免疫测定 (mAbs EIA法) 简单、快速,已商品化,适于大样本检测,但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和HBsAg低表达及某些表位表达不充分的标本。 分子探针杂交法 简单、快速,对混合型检测非常敏感,已商品化,适于大样本检测,但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。 型特异性引物PCR法 简单、快速,成本低,具有较高的灵敏度,适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。 常用HBV基因分型方法比较 * 2020/11/4 * 客观看待乙肝DNA 1.乙肝病毒DNA 定量往往被描述成为判断乙肝传染性大小、病情严重程度以及治疗效果的“金指标”,其

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