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菌落总数检查作业指导书 菌落总数检查作业指导书 PAGE / NUMPAGES 菌落总数检查作业指导书 菌落总数测定作业指导书 1、目的： 规定了菌落总数检测方法。 2、合用范围： 合用于固体、液体类样品菌落总数的检测。 3、编写依照： GB4789.2-2010《食品安全国家标准 食品微生物学查验 菌落总数的测定》 4、术语和定义： 4.1 菌落总数 食品检样经过办理，在必定条件下（如培育基、培育温度和培育时间等）培育后，所得每 g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 设施和资料： 除微生物实验室惯例灭菌及培育设施外，其余设施和资料以下： 5.1 恒温培育箱： 36℃± 1℃， 30℃± 1℃ 5.2 冰箱： 2℃～ 5℃ 5.3 恒温水浴箱： 46℃± 1℃ 5.4 天平：感量为 0.1g 5.5 均质器 5.6 振荡器 5.7 无菌吸管： 1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头 5.8 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL 3.9 无菌培育皿：直径 90 mm 5.10 pH 计或 pH 比色管或精细 pH 试纸 5.11 放大镜或 / 和菌落计数器 培育基和试剂 : 6.1 平板计数琼脂培育基：见附录 A 中 A.1 6.2 磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 A.2 6.3 无菌生理盐水：见附录 A 中 A.3 查验程序： 菌落总数的查验程序见图 1。 检 样 25g（ mL ）样品 +225mL 稀释液，均质 倍系列稀释 选择适合 2 个～ 3 个连续稀释度的样品匀液， 各取 1mL 分别加入无菌培育皿内 每皿中加入 15mL～ 20mL 平板计数琼脂培育基，混匀 培育 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告 图 1 菌落总数的查验程序 操作步骤： 8.1 样品的稀释 8.1.1 固体和半固体样品： 称取 25g 样品置盛有 225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内， 8000r/min ～10000r/min 均质 1min～2min，或放入盛有 225mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1min～2min，制成 1:10 的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管汲取 25mL 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生 理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适合数目的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 用 1mL 无菌吸管或微量移液器汲取 1:10 样品匀液 1mL，沿管壁迟缓注 于盛有 9mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要涉及稀释液面） ， 振摇试管或换用 1 支无菌吸管频频吹打使其混淆均匀， 制成 1:100 的样品匀液。 8.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递加稀释一次，换用 1 次 1mL无菌吸管或吸头。 8.1.5 依据对样品污染情况的预计， 选择 2 个～ 3 个适合稀释度的样品匀液 （液体样品可包含原液），在进行 10 倍递加稀释时，汲取 1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别汲取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白比较。 实时将 15mL～20mL 冷却至 46℃的平板计数琼脂培育基 （可搁置于 46℃ ±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混淆均匀。 8.2 培育 8.2.1 待琼脂凝结后，将平板翻转，36℃± 1℃培育 48h±2h。水产品 30℃± 1℃ 培育 72h±3h。 假如样品中可能含有在琼脂培育基表面洋溢生长的菌落时，可在凝结后 的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培育基（约 4mL），凝结后翻转平板，按 条 件进行培育。 8.3 菌落计数 可用肉眼察看，必需时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数 量。菌落计数以菌落形成单位（ colony-forming units ，CFU）表示。 8.3.1 选用菌落数在 30CFU～300CFU之间、无延伸菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU 的平板记录详细菌落数，大于 300CFU的可记录为多不行计。每个稀释度的菌落数应采纳两个平板的均匀数。 此中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采纳，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落散布又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。 当平板上出现菌落间无显然界限的链状生长时，则将每条单链作为一个 菌落计数。 结果与报告： 9.1 菌落总数的计算方法 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适合计数范围内，计算两个平板菌 落数的均匀值，再将均匀值乘以相应稀释倍数，作为每 g(mL)样品中菌落总数结果。 如有两