菜花DNA粗提取与鉴定.docVIP

菜花DNA的粗提取与鉴定 菜花DNA的粗提取与鉴定 菜花DNA的粗提取与鉴定 菜花 DNA 的粗提取与鉴定 一、实验目的 1. 2. 3. 4. 二、实验原理 1. 2. 3.了解并掌握实验原理； 学会动物材料和植物材料的DNA 提取和鉴定的方法； 通过本实验培养实验操作能力和观察能力； 学会使用微量可调移液器。 菜花表皮部分细胞分裂旺盛， DNA含量丰富，并且材料无色，便于鉴定；研磨液中的变性剂 SDS可促使细胞破裂，释放出 DNA； DNA 不溶于酒精，而细胞中某些物质溶于酒精，可以用酒精提取含杂质较少的 DNA； 4.DNA 中的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸形成ω-羟基 -γ-酮基戊醛，她和二 苯胺试剂沸水浴条件下作用呈现蓝色，因此二苯胺可作为鉴定DNA 的试剂。 三、材料器具 菜花（顶部部分）研磨过滤器移液器试管玻璃棒水浴锅研磨液无水乙醇（冰）二苯胺试剂 1 / 2 注：试剂要求 1.无水乙醇提前放冰箱冷藏，可容易并且快速溶解DNA。 2.二苯胺试剂 A 与二苯胺试剂 B 现用现混， A 为强酸溶液，用时需小心， B 液加 A 液中。 A：B=100:1 四、实验步骤 1.研磨液释放 DNA 切取菜花表层约 5g，放入研磨过滤器外套筒中，加入 2ml 研磨液，插入研磨杆，朝一个方向按压旋转研磨 3min。 2.冰无水乙醇提取DNA 打开研磨杆上盖，用移液器取研磨液2ml，转至试管中，缓慢沿试管闭加入 4ml 冰无水乙醇，轻轻旋转试管，可看到白色絮状物出现，即提取出的缠绕在一起的 DNA。 3.二苯胺鉴定 DNA a)溶解 DNA：用玻璃棒挑出白色絮状 DNA 转移到另一试管中，加 1ml2 mol/L 的 Nacl 溶液使 DNA 溶解以液体形式呈现，便于鉴定。 b)设置对照组：另外一试管中加 1ml 2 mol/L 的 Nacl 溶液作为对照。并对两只试管进行标记。 c)二苯胺水浴鉴定：两只试管中各加 1ml 二苯胺试剂，在沸水浴中加热10min，观察颜色变化。 五、实验结果 加入白色絮状物的试管中颜色变为蓝色，另一对照试管中没有颜色变化，说明提取出了菜花中的 DNA。 2 / 2