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植物雌激素葛根素、大豆苷元对人成骨样细胞MG63的作用及相关分子机制的研究 植物雌激素葛根素、大豆苷元对人成骨样细胞MG63的 作用及相关分子机制的研究 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 研究生签各勖?够刷噬章.仃“乙磐赡缀 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 导师签章: 砻骇艺 口,/ 年/ 月 日 研究生签名:蜀\矿歹目 录 中文摘要英文摘要英文缩写研究论文植物雌激素葛根素、大豆苷元对人成骨 样细胞.的 作用及相关分子机制的研究 ?珥? 莉舌材料与方法结果附图附表讨论结论参考文献 综述白细胞介素.与绝经后骨质疏松症的研究进展? 致谢 个人简历.:.中文摘要 植物雌激素葛根素、大豆苷元对人成骨样细胞. 的作用及相关分子机制的研究 摘 要 目的:研究已证实异黄酮类化合物葛根素和大豆苷元 对去卵巢大鼠具有明显的抗骨质疏松活性,并能够显著促进原代 培养的大鼠成骨细胞增殖和分化。奉室前期工作已证实葛根素能剂量依赖 性促进大鼠成骨样细胞增殖,抑制体外破骨细胞性骨吸收功能并在体外促 进小鼠长骨生长,但有关两种植物雌激素对人成骨细胞作用及作用机制的 研究尚未见报道。本工作在文献报道和前期研究的基础上,以人成骨样细 胞.为研究模型,观察了葛根素和大豆苷元对人成骨细胞增殖、分化 、存活、骨吸收调节因子如骨保护素,/.激活. 受体配体 ,/.激活受体 .,系统、白介素..,. 及其受体表达的作用,并对其可能的作用机制进行了初步探讨。 方法: 法观察葛根素和大豆苷元对人成骨样细胞.细胞的增殖能 力的影响。 引用流式细胞术分析葛根素和大豆苷元对.细胞细胞周期分布的 影响。 磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶 ,活性。 染色法观察葛根素和大豆苷元对顺铂诱导的细胞凋亡能力的影 响。 。逆转录聚合酶链式反应 ,检测、、.及其受体儿.、、、 、凋亡抑制蛋白.和染色体连锁的凋亡抑制蛋白. ,的表达水平。 酶联免疫吸附实验. ,法检 测.蛋白的表达水平和型胶原酶的含量。 、 免疫印迹 技术检测、、.、中文摘要 和蛋白的表达水平。 ,观察在 应用雌激素受体 阻断剂 葛根素和大豆苷元调节成骨细胞上述生物学性能中的作用。 采用干扰技术 ,分别对.细胞的 雌激素受体 ,【和基因进行沉默,筛 选出阳性单克隆,扩大培养后用 技术分别鉴定出或 高、中抑制表达克隆用于确定亚型在介导两种植物雌激素调节 成骨细胞上述生物学性能中的作用。 应用 技术及特异性信号阻断剂?/阻断剂 和阻断剂分析两种植物雌激素对成骨细胞发挥作 用的相关信号通路。 结果: 葛根素和大豆苷元均可显著促进人成骨样.细胞增殖,进一步研 究发现两种植物雌激素可使期细胞比例减少,期细胞比例增 加。 葛根素和大豆苷元可通过增加.细胞中活性和型胶原含量 促进成骨细胞分化成熟。 葛根素和大豆苷元均可显著抑制由顺铂诱导的.细胞发生凋亡, 进一步研究发现两种植物雌激素可上调.细胞中和. 的表达。 葛根素和大豆苷元均显著上调.细胞中的及蛋白表 达,同时下调?,的及蛋白水平。 阻断剂 ,可部分阻断葛根素和大豆苷元对.细胞的 上述作用,其中葛根素对.细胞的增殖和分化是由和 共同介导;大豆苷元对.细胞的增殖是主要由介导,其分化 是由和共同介导;两种植物雌激素对.细胞.产生 主要是由介导。 葛根素和大豆苷元均能上调成骨细胞中和的和蛋白 表达水平;大豆苷元对成骨细胞中两种亚型表达水平的作用强于葛 根素。 葛根素能上调.细胞中和的磷酸化表达水平;大豆苷中文摘要 元仅上调.细胞中的磷酸化水平,对成骨细胞中的磷 酸化表达水平作用不明显。 明显阻断葛根素和大豆苷元诱导的促成骨细胞增殖和分化作 用;仅能阻断葛根素诱导的成骨细胞上述作用,对大豆苷 元作用不明显。 可明显阻断两种植物雌激素对成骨细胞中.的作用, 对两种植物雌激素诱导成骨细胞的上述作用效果不明显。 结论: 葛根素、大豆苷元对人成骨细胞的增殖、分化及表达有明显的促 进作用,对和.表达则有一定的抑制作用,此外两种植物 雌激素还具有抗成骨细胞凋亡的功能。 葛根素和大豆苷元均可部分经由途径对成骨细胞发挥上述作用,其 巾葛根素对成骨细胞的增殖和分化是由和共同介导;大豆苷 元对成骨细胞的增殖是主要由介导,其分化是由和共 司介导;两种植物雌激素对成骨细胞.产生主要是由介导。此 外,两种植物雌激素均能上调成骨细胞中和的表达水平,其 中大豆苷元的作用强于葛根素。 葛根素和大豆苷