紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化.docVIP

紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化 ( ) 应用与环境生物学报 1998 ,4 4:335,3391998212225 Chi n . J . Appl . Envi ron . Biol . 紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化 3 黄玉山邱国华3 ( )香港九龙城市大学生物及化学系 香港 ( )中山大学生物工程研究中心 广州 510275 摘 要 利用 1 次 Sep hadex G250 凝胶过滤和 2 次 QA E Sep hadex A225 离子交换层析的方法 , 从最后 6 d 用(ρ( ( ) ) CuCl 处理= 20 mg/ L 、20 d 龄的紫羊茅 Fest uca r ubra cv. Merlin根中分离纯化了 1 个铜结合肽 CuB P2 2 ) λ 2a, 该肽在 Superdex Peptide HR 10/ 30 预装柱的 FPL C 凝胶过滤中在254nm 处只出现一个峰 , 经分子量标 λ 准曲线估计 , 其 M 约为 1 400 , 在 Delta2Pak C18 的反相 HPL C 中 , 在254 nm 处也只有 1 个紫外吸收峰值 , r 这都说明该肽已经达到了较高的的纯度. 通过光谱分析 , 发现该肽的最大紫外吸收值在 248 . 1 nm 处. 对 Cu 结 合物在植物体内的存在状态进行了讨论. 关键词 紫羊茅 ; 铜诱导 ; 铜结合肽 ; 分离和纯化 中图法分类号 Q945 . 14 + Q514 . 3 ? O614 . 121 ISOL ATIO N A ND P URIFICATIO N OF M ETAL2BI ND I NG PEPTID E FROM COPPER2TREATED F ES TU CA R UB RA cv. M ERL I N ROOTS 3 WON G Yuk2Shan Q IU Guo hua 3 ( )Depa rt ment of B iology a n d Che m ist ry , Ci t y U ni versi t y of Hon g Kon g , Kowloo n , Ho ng Ko ng )( , Guangzho u 510275 Zhon gsha n U ni versi t y B iotech nology Resea rch Center , Abstract Through a gel filt ratio n chro matograp hy o n Sep hadex G250 and t wice o n F PL C io n ex2 ( ) change chro matograp hy o n QA E Sep hadex A225 , a metal2binding pep tide CuB P22awas p urified f ro m ) ( 202day2old F. r ubra root s t reated by copper supplied wit h CuClat t he co ncent ratio n of 20 mg/ L 2 during t he last 6 days. CuB P22a showed a single peak at 254 nm and was about 1 400 dolto ns af ter t he calibratio n by standard molecular weight mar kers in F PL C gel filt ratio n o n p re2packed Superdex Pep tide HR 10/ 30 column. It s p urit y was judged by t he single peak at 254 nm in t he elutio n p rofile of reversed p hase HPL C o n Delta2Pak C18 . By U V absorbance spect rum analysis , t he pep tide showed t he maximal absorbance at 248 . 1nm. The metal2binding pep tides in plant cells are also disscussed. Key words Fest uca r ubra cv. Merlin ; copper t reat ment ; copper2binding pep tide ; isolatio n and p urifi2 catio n 2 + 2 + 2 + ( ) 当植物处于过量