2021年江南大学微生物研究报告生复试内容.pdf

- - 2005 微生物实验操作复试 1 有哪些方法可以提高显微镜的分辨率？ 答：显微镜的分辨率〔 Resolving power〕是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。其用镜头 所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示： 1 D 2 N. A 物镜的数值口径〔 Numberical aperture〕，简写为〔 N.A 〕：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上， 能被物镜所聚集的量。可用公式表示： N. A n sin n——标本和物镜之间介质的折射率 θ——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角 可见物镜的分辨率是由物镜的 NA 值与照明光源的波长两个因素决定。 NA 值越大， 照明光线波长越短， 那么 D 值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小 D 值，可采取以下措施 : 〔1 〕 降低波长λ值，使用短波长光源。 〔2〕增大介质 n 值以提高 NA 值〔 NA=nsinu/2 〕。〔3〕 增大孔径角θ 值以提高 NA 值。〔4〕 增加明暗反差。 2 革兰氏染色的步骤？哪几步最为关键？ 答：〔 1〕1、细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养 16-24h。 2、制片：取菌种培养物常规涂片、枯燥、固定。 3、初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色 1min 后，用水洗去剩余染料。 4、媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约 1min，水洗。 5、脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用 95%乙醇从载玻片上端冲洗脱色， 直到流下的酒精无明显紫色时，立即水洗。 6、复染：滴加番红液，染色 2min ，水洗 7、用滤纸吸干，油镜镜检。 〔2〕脱色是革兰氏染色中最为关键的步骤，其中乙醇的浓度，用量及涂片厚度都会影响脱色速度，最终影 响观察效果。如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性；如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳 性 3 涂片染色前为什么要先进展固定？固定时应注意什么问题？ 答： 1〕杀死微生物，固定细胞构造。 2 〕保证菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉。 3 〕改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。 注意问题：温度以载玻片接触手背，手背不觉得烫为宜，防止出现变形细胞；注意在通过火焰时，涂有细菌的一面向 上。 4 同一酵母菌培养液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数，所得结果是否一样？为什么？进一步比较两种计 数法的优缺点？ 答：所得结果不一样。血球计数板记得的菌体数是活菌体和死菌体的总和，而平板菌落计数法记得的是活菌体的 量。 血球计数板优点是直观、快速，方便，但该法计数的是样品中的总菌落数，无法计数活菌数。平板菌落计数法的 优点是能粗出样品中的活菌数，缺点是手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 5 如何测定水中的大肠菌群数？测定水中大肠菌群数有什么实际意义？ 答： 大肠菌群系指一群能发酵乳糖，