兽用基因工程生物制品的安全性.pptVIP

第一页，共28页 兽用基因工程生物制品是用微生物、微生物代谢产物、原虫、血液或组织等加工制成，作为预防、治疗、诊断特定传染病或其他疾病的制剂。 作为畜禽疾病预防控制的利器，兽用生物制品在畜牧业的发展中发挥着越来越重要的作用，其研发和生产应用促进了畜牧业的繁荣。 由于其本身的特性和安全管理方面的漏洞，在研发和应用中也可能出现某些生物灾害。概括起来主要有：实验研究人员的感染、病原微生物对环境的污染、以及遗传性状不稳定。 兽用生物制品的生物安全问题直接或间接影响人类和动物的身体健康和生命安全。 第二页，共28页 第三页，共28页 第一节 兽用基因工程生物制品概况 目前的兽用基因工程生物制品，可分为基因工程亚单位疫苗、重组活载体疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗、多肽疫苗和转基因植物疫苗等几类。 1.基因工程亚单位疫苗或基因工程蛋白质疫苗 通过基因工程将病原微生物的主要免疫原基因在宿主细胞表达，再从表达产物制备而成。其产品或是病原蛋白质(或亚单位)，或是其抗原决定簇。 这类疫苗可能产生的问题：与原始蛋白质的结构差异、异源蛋白质对宿主的毒性、细菌表达系统对外源基因的识别、T细胞对蛋白成分非敏感。 对上述问题的解决途径包括：采用真核生物细胞为宿主、采用能分泌重组蛋白质的细菌为宿主、突变外源基因的糖基化位点。 第四页，共28页 目的基因的获取 工程菌的构建 目的基因表达 蛋白质分离与纯化 产品 第五页，共28页 2. 核酸疫苗 核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA) 直接导入动物体细胞内, 并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白, 诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答, 以达到预防和治疗疾病的目的。 核酸疫苗的优点是：免疫保护力增强、制备简单、同种异株交叉保护、持久免疫应答。 核酸疫苗的缺点是：免疫原性较低、用量大、真核细胞不存在质粒DNA的主动 核－质 间传输途径。 提高核酸疫苗免疫原性的尝试主要有：抗原基因上游插入RNA复制酶基因、在抗原基因下游插入细胞因子编码基因、提高细胞转染效率、改变重组质粒非编码区。 核酸疫苗通常不能在动物细胞中长期复制或不复制。 第六页，共28页 第七页，共28页 3. 重组活载体疫苗 重组活载体疫苗包括：重组DNA病毒疫苗和重组RNA病毒疫苗。 重组DNA病毒疫苗是将抗原基因转移至病毒DNA载体上而制备的重组DNA疫苗。 重组RNA病毒疫苗是将抗原基因转移至病毒RNA载体上而制备的重组RNA疫苗。 重组活载体疫苗的优点主要在于：宿主体内有识别病毒的免疫系统、病毒能主动将其DNA或RNA传输至细胞内、表达量大。 重组活载体疫苗的主要不足在于：对免疫力弱者可能致病、容易出现非相关免疫反应、需要避开先天或后天的抗病毒免疫，等等。 第八页，共28页 第九页，共28页 第二节 兽用基因工程生物制品的安全性 兽用基因工程生物制品的应用越来越广泛，其安全性一直受到人们的密切关注。 对兽用基因工程生物制品安全性的考虑，主要在以下几方面：对使用动物的毒性、致癌的可能性、外源DNA与宿主染色体整合的可能性、诱导产生抗DNA 抗体的可能性。 对基因工程生物制品使用后的担忧主要是持续表达外源抗原可能出现的后果：产生耐受性、自动免疫、过敏反应和超敏反应等，或最终导致机体免疫机制受抑制而易感染其他病原体。 基因工程生物制品安全性评价应包括：受体细胞的安全性、基因操作的安全性、基因重组活疫苗的安全性及工业化生产的潜在安全性。 第十页，共28页 一、受体细胞的安全性 受体细胞是用于制备基因工程生物制品的表达系统。可分为原核表达系统和真核表达系统两大类。 选择受体细胞时应重点考虑： 安全性高且不造成生物污染； 便于重组DNA导入； 便于筛选克隆子； 能使重组DNA分子在细胞内稳定维持； 适合外源基因高效表达和表达产物分泌或累积； 对遗传密码无偏倚（没有选择性表达）； 遗传性稳定、易于扩大培养或发酵； 对真核表达系统还要求有较好的翻译后加工机制。 第十一页，共28页 1. 原核生物表达系统 原核生物表达系统是研究最透彻的表达系统，常用细菌作为受体，具有操作简单、价格低廉、外源基因表达水平高的特点。最为常 用的是大杨杆菌和枯草芽孢杆菌。 大肠杆菌是肠道菌群的组成部分，大部分为非致病 菌，但某些血清型可引起腹泻和败血症。作为外源基因受体的大肠杆菌菌株遗传背景清楚、目的基因表达水平高、培养周期短、抗污染能力强。 枯草芽孢杆菌是需氧的革兰氏阳性菌，细胞内存在着分泌系统，常常能将重组蛋白质分泌到培养基中。枯草杆菌本身没有致病性，但其可用的载体株有限，外源基因的表达量也低于大肠杆菌。 第十二页，共28页 大 肠 杆 菌 枯草芽孢 杆菌 第十三页，共28页 2. 真核表达系统 原核表