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基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 和 等技术，赋予生物以新的 ，创造出更符合人们需要的新的生物 和生物 。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 人类需要的基因产物 基因 DNA分子水平 基因表达载体的构建 目的基因的获取 目的基因的检测与鉴定 导入受体细胞 DNA重组 转基因 遗传特性 类型 产品 基因工程的概念 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基础理论 技术发明 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 主要在原核生物中 特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点 磷酸二酯键 EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 分布： 作用特点： 切点： 举例： 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 限制性内切酶 限制酶 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 DNA连接酶——“分子缝合针” 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 基因的载体——“分子运输车” 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 （一）目的基因的获取 1、目的基因：编码蛋白质的基因 （1）从基因文库获取：用限制酶切割DNA,形成许多DNA片段（基因组文库) （2）人工合成法： ①反转录法：用mRNA反转录出DNA片段（cDNA） ②化学合成法：根据蛋白质的氨基酸序列，推测mRNA 序列，再推测DNA序列，然后人工合成DNA（cDNA） 2、基因文库: （1）基因组文库:一种生物所有的基因 （2）部分基因文库:一种生物的部分基因（cDNA） 3、获取方法： 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制__________ _的核酸合成技术 ③条件：________ 、 _______________、 ___________ 、 ___________. 前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 选修1 P60 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 （3）利用PCR技术扩增目的基因 模板 基因工程专题1-4课时复习课用共2课时上完 ⑥过程： a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的 延伸，