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基因工程基本操作顺序 基因工程基本操作顺序 1、基因工程至少需要哪三种工具？ 2、这三种工具分别起什么作用？ 温故知新： 基因工程基本操作顺序 1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作顺序 基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？ 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 问题1 基因工程基本操作顺序 一：目的基因的获取 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 1.目的基因主要是指___________________ 编码蛋白质的基因 什么是目的基因 2、也可以是具有调控作用的因子 基因工程基本操作顺序 获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、人工合成目的基因 已知序列 未知序列 基因工程基本操作顺序 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 基因组文库 部分基因文库 （包含一种生物的所有基因） （包含一种生物的一部分基因） 基因工程基本操作顺序 基因组文库与部分基因文库的关系 基因工程基本操作顺序 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。 基因工程基本操作顺序 (一)从基因文库中获取目的基因 提取某种生物的全部DNA 用适当的 限制酶 一定大小的DNA片段 将DNA片段 与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 基因工程基本操作顺序 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体 连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA 聚合酶 导入受体菌 中储存 反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 基因工程基本操作顺序 cDNA合成过程是： 第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA 互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。 第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链 降解，使之变成单链的DNA。 第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用 下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 基因工程基本操作顺序 问题2 为什么用生物发育某个时期的mRNA反转录得的DNA只有这种生物的部分基因？ 某个时期的发育是基因选择性表达的结果 基因工程基本操作顺序 两种基因文库的主要区别如下表（课本P10） 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 基因多少 部分基因 全部基因 物种间的基因交流 可以 部分基因可以 总结 基因工程基本操作顺序 1、概念：PCR全称为________________，是一项在生 物____复制_____________的核酸合成技术 3、条件： 2、原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 (二)利用PCR技术扩增目的基因 模板 （目的基因） 原料(脱氧核苷酸) 引物（一小段单链DNA） DNA聚合酶（耐高温） 温度控制 4、操作前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。 基因工程基本操作顺序 6、结果 。 5、扩增形式： 指数形式（2n） 在短时间内大量扩增目的基因 7、过程： a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作 用下，_____断裂，形成___________ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与 DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物开始进行碱基互补配对，合成与 模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 基因工程基本操作顺序 基因工程基本操作顺序 (二)利用PCR技术扩增目的基因动画演示 基因工程基本操作顺序 细胞内复制 .VS. PCR扩增 DNA母链 4种脱氧核苷酸　 Taq DNA聚合酶 引物（2