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第五章发酵产物的分离纯化 ———————————————————————————————— 作者： ———————————————————————————————— 日期： 第五章 发酵产物的别离纯化 下游加工亦称发酵后处理，是指从发酵液或酶反响中别离纯化目的产物并加工成成品的过程。 第一节 下游加工过程概述 一、下游加工过程的重要性：1. 获得商业产品的关键环节。2. 拥有市场竞争力的重要保证。 二、下游加工过程的特点 1. 发酵液是复杂的多相系统，属非牛顿液体，从中别离所需产品困难大。 2. 发酵产品在培养液中具有浓度低，稳定性差，对酸碱等外界环境十分敏感，容易失活。 3. 下游加工过程代价昂贵，产品回收率不是很高。 4. 发酵过程复杂，要求下游加工工艺应具有相当的适应性，以确保最终产品的纯度和质量。 三、下游加工工程的一般流程 预处理和固-液别离。2.产物的初别离3.产物的高度纯化4.成品加工 第二节 发酵液的预处理与固-液别离 一、发酵液的一般特征 1. 含水量高2. 产品浓度3. 悬浮物颗粒小，密度与液体相差不大 4. 固体粒子可压缩性大 5. 液体黏度大，大多为非牛顿型流体 6. 产物性质不稳定 二、发酵液预处理的目的和要求 〔1〕改变发酵液的物理性质，促进悬浮液中别离固形物的速度，提高固液别离器的效率 〔2〕尽可能使产物转入便于后处理的某一相中〔多数是液体〕 〔3〕去除发酵液中局部杂质，以利于后续各步操作。 2.发酵液预处理的要求: 〔1〕菌体的别离 〔2〕固体悬浮物的去除 〔3〕蛋白质的去除 〔4〕重金属离子的去除 〔5〕色素、热原质、毒性物质等有机杂质的去除 〔6〕改变发酵液的性质 〔7〕调节适宜pH值和温度 三、发酵液预处理的方法：1. 重力法2. 热处理法3.等电点法4. 絮凝法 1. 重力法 在工业上用的较多的主要是离心和过滤。过滤常用板框真空吸滤或电动筛等，离心和过滤能否顺利进展取决于很多因素。一般温度高，压力大，发酵液粘度小，滤布选用适当，助溶剂适宜，搅拌都可以提高过滤速度。 2、加热法 降低悬浮液的黏度，除去某些杂蛋白，降低悬浮物的最终体积，破坏凝胶状构造、增加滤饼的空隙度。不适用热敏性的物质 3、等电点法 调节溶液pH至等电点处，可使两性电解质所带净电荷为零，相邻分子之间由于没有静电斥力而趋于沉淀。适用于氨基酸、蛋白质和其他两性物质的沉淀别离。 4. 凝聚和絮凝法 原理：电解质将胶体粒子外表上的电荷中和，减少存在于胶体粒子间的静电斥力，使范德华力占优势，这样胶体就会凝聚成较大、较密实的粒子〔凝聚〕。 或在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团使之更容易过滤〔絮凝〕。 常用的凝聚方法：在稀溶液中参加电解质以促进凝聚。试剂包括酸、碱、简单电解质和合成的高分子电解质。 常用的絮凝剂：明胶、甲基纤维素、多聚丙烯酸、聚胺衍生物、氯化钙、磷酸氢二钠 影响絮凝的因素：絮凝剂的添加量、发酵液的pH、絮凝剂的分子量、搅拌转速、搅拌时间 四、发酵液的相对纯化 1. 高价无机离子的去除 去除钙离子：通常使用草酸。但由于草酸溶解度较小，不适合用量较大的场合，可用其可溶性盐，草酸价格昂贵，注意回收。 去除镁离子：参加三聚磷酸钠，与镁离子形成络合物。用磷酸盐处理，也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。 去除铁离子：可参加黄血盐，使其形成普鲁士蓝沉淀而除去。 2. 杂蛋白质的除去 〔1〕沉淀法 ①蛋白质在酸性溶液中，能与一些阴离子，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； ②蛋白质在碱性溶液中，能与一些阳离子如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。 〔2〕吸附法 参加某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 〔3〕变性法 蛋白质由有规那么的排列到无规那么构造的变化过程成为变性。变性的蛋白溶解性小。使蛋白质变性的方法有：加热，调节pH，加酒精等有机溶剂或外表活性剂等 。 变性法的局限性：加热法只适合于对热较稳定的目的产物；极端pH也会导致某些目的产物失活，并且要消耗大量酸碱；而有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。 五、固-液别离过程及设备简介 意义：固-液别离过程下游加工的重要环节，用于发酵液的预处理和生物产品的纯化、精制等环节。 方法：常用的方法有过滤、离心。此外还有膜别离、双水相萃取和扩张床吸附等方法。 影响发酵液固-液别离的主要因素：菌体的大小、形状及发酵液的黏度，还有发酵液的温度、pH值、加热时间等。 1. 过滤：用过滤介质将悬液中的固形颗粒与液体别离的过程。 常用的过滤方式：加压过滤和真空过滤 典型设备主要有：板框压滤