放射性配体与受体结合分析实验(RBA)方法.ppt

放射性配体与受体结合分析实验（RBA）方法;内容;实验定义与原理;RBA的分类;实验材料与仪器;实验材料;实验仪器;低温高速离心机 凯达，TGL20M 超低温冰箱 海尔;数显恒温水浴锅 金燕，HH-S26S 制冰机 GELIN 型号IMS-50 automatic ice flakes;电热恒温水温箱;实验材料;枪头;Tris PPO与POPOP;过滤装置;放射性化合物;实验方法流程;实验方法流程;实验具体操作（D1、D2、5-HT）;2、制备膜受体 ;3、加样;4、 受体配体结合反应;5 、分离游离及结合的放射性配体;6、 测定结合型放射配体每分钟放射计数;7、数据处理;8???各种指标;Scatchard方程与作图（饱和实验）;Scatchard方程与作图;饱和曲线; 饱和曲线(saturation curve); 2）曲线的高度取决于[RT]。在曲线起始段，曲线上升的快慢即曲线的斜率取决于配基与受体的亲和力，所以，KD越小 (亲和力越大)，饱和曲线上升越快，KD越大 (亲和力越小)，饱和曲线上升越慢。 （即：亲和力越大，受体与配件结合速度越快，时间越短） k1, v1 [R]+[L] －－－－ [RL] k2, v2 KD＝K2/ K1=[R][L]/[RL]; 饱和曲线的形状和KD有关（如图1）。 ;饱和曲线曲线的高度取决于[RT]（如图2）。 ; 质量作用定律 (Mass action law)： 受体和配基的结合反应服从可逆反应的质量作用定律，可用下式表示: k1, v1 [R]+[L] －－－－ [RL] （1） k2, v2 上式中，[R]和[L] 为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物浓度，v1和v2为结合速率和解离速率，k1和k2为结合速率常数 (association rate constant) 和解离速率常数 (dissociation rate constant)。 ;根据质量作用定律： v1 = k1 [R] [L] ；v2 = k2 [RL] 当反应达到平衡后， v1 = v2 , 即: k1 [R][L] = k2 [RL] ,则 平衡解离常数（KD）的数学表达式为： KD＝K2/ K1=[R][L]/[RL] （2） ;Scatchard作图;图3 简单单位点系统RBA的Scatchard作图;Hill方程与作图;将（3）式两边取对数 ;非特异性结合(non-specific binding，NSB);图4 饱和曲线实验中TB、SB和NSB的关系;竞争曲线;数学表达;闪烁液;各受体的非标与同位素;RBA的安全问题;β射线;放射型物质发出的射线有三种：;三种射线;α射线;β射线;γ射线;β射线;放射防护措施;外照防护措施;内照射防护措施;放射性“三废”处理;表面放射性污染的处理;例子：M胆碱受体配体结合实验;试剂;受体组织的制备;受体配体结合;孵育与测量;下图为测量结果之一;作图求值（按Scatchard方程式B/F=-B/KD + Bmax /KD，以B为横坐标，相应的B/F为纵坐标，直线回归求斜率-1/KD ）和截距（ Bmax /KD ）;Hill作图;二、竞争曲线;谢谢