革兰氏阴性需氧杆菌.ppt

（三）微生物学诊断 1、细菌学诊断 2、PCR技术诊断 本属细菌为革兰氏阴性球杆状细菌，包括2个种： 马生殖道泰勒菌(T．equigenitalis) 驴生殖道泰勒菌（T．asinigenitalis） 前者过去归于嗜血杆菌属，旧名为马生殖道嗜血杆菌，致马化脓性子宫炎。后者新近在美国报道，未发现有致病性。?? 一、主要生物学特性 菌体常为球杆状，大小为0.8μm×0.5μm。 革兰染色阴性，两级着色。 兼性厌氧，无运动力。 不溶血。 对营养要求苛刻，培养困难，生长缓慢。 用马血巧克力琼脂置CO2中培养，48h可见直径小于1mm的细小、灰白色菌落，继续培养，菌落直径可增至2-3mm。 麦康凯培养基不生长。? 二、致病性 马生殖道泰勒菌自然条件下只感染马。引致马化脓性子宫内膜炎、宫颈炎和阴道炎。主要通过交配和人工授精传染。 母马感染后数日内即发生化脓性子宫炎，排出大量脓性分泌物，当子宫内膜康复后数周至一年，仍可从阴道内分离到本菌。母马表现为暂时性不育，怀孕母马偶尔在怀孕60d内流产，也可产下活的带菌马驹。 公马的包皮带菌，但无症状。 三、微生物学诊断 1、镜检 可取患病母马的子宫排出物涂片、镜检。 2、分离鉴定 取流产胎儿组织、母马子宫和阴道分泌物、公马包皮粘液或精前液，在48h内接种马血巧克力等特殊培养基，置37℃含10％CO2的温箱培养7d，逐日观察。 进一步鉴定应做生化试验及用相应抗体做玻板凝集试验。 3、PCR法 检出率高、快速，仅需6h出结果，还可鉴别两种泰勒菌。? 4、血清学检查 急性感染母马在感染后3～7周出现补体结合抗体，但带菌母马通常阴性，带菌公马根本不产生补体结合抗体，故用补体结合试验做流行病学回顾性调查并不可靠。? 三、微生物学诊断 布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查。 细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。 （一）细菌学检查 1、病料 流产胎儿的胃内容物、胎盘、羊水、阴道分泌物、乳汁和尿液等。 2、诊断方法 病料 柯氏染色 涂片 镜检 分离培养 纯培养 鉴定 豚鼠 血清抗体 （二）血清学检查 1、用已知抗体检测抗原 用已知抗体检查病料中的布氏杆菌，或鉴定分离菌是否为布氏杆菌可用： 荧光抗体技术 反向间接血凝试验 间接炭凝集试验 免疫酶组化法 2、用已知抗原检测抗体 动物感染该菌7～15d出现抗体，检测抗体是布病诊断和检疫的主要手段。 方法： 玻板凝集试验 虎红平板凝集试验 乳汁环状试验 试管凝集试验 补体结合试验 试管凝集试验 操作按检疫规程进行。 牛、马、骆驼血清凝集价1:100时判为阳性，1:50为可疑。 羊、猪、狗等血清凝集价1:50为阳性，1:25为可疑。 可疑病畜于3～4周后采血重检，如仍为可疑反应，牛、羊即可按阳性处理；猪、马则须视情况而定。 虎红平板凝集试验 取被检血清和虎红平板抗原各0.03ml，滴加于玻板上，混匀，在4～10min内出现任何程度凝集者即为阳性反应。 乳汁环状试验 为检查新鲜乳汁中抗体的方法，操作简便，准确性较高，常被用于畜群布氏杆菌病的监测。 补体结合试验 特异性和敏感性均较凝集试验高，是慢性布氏杆菌病一种可靠的诊断方法，已作为世界各国清除病畜的必要手段。 规定1:10被检血清阻止溶血在50％以上，即为阳性反应。因补体结合反应的操作方法复杂，只在特殊情况下才应用。 （三）变态反应检查 变态反应现象一般在感染后的20～25d出现，因此不宜作早期诊断。本法适合于动物的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次为猪。 检测时，将布氏杆菌水解素0.2ml注射于羊尾根皱襞部或猪耳根部皮内，24及48h后各观察反应一次。若注射部发生红肿，即判为阳性反应。此法对慢性病例的检出率较高。 四、免疫防治 我国目前用的疫苗： M5弱毒活菌苗 可用于牛、羊和鹿布病的预防。皮下注射或气雾免疫。免疫期羊1年半，牛、鹿各为1年。 M90弱毒活菌苗 同M5弱毒活菌苗 。 S2弱毒活菌苗 可用于猪、羊、牛等动物，甚至可以接种怀孕动物而不引起流产。免疫方法采用饮水、气雾和皮下注射3种。免疫期猪为1年，牛和羊均为2年。 是新建立的一个属，该属成员来自假单胞菌属Ⅱ群，现有30多种细菌，对人畜致病的主要有鼻疽伯克氏菌及伪鼻疽伯克氏菌。 一、鼻疽伯克氏菌（B.mallei） 鼻疽伯克氏菌，原名鼻疽假单胞菌，惯称鼻疽杆菌，为马、骡、驴等单蹄兽鼻疽病的病原体，也能感染人及其他家畜和多种野生动物。此病可呈急性或慢性经过，病变特征为皮肤、鼻腔粘膜、肺脏及其他实质器官形成典型的鼻疽结节和溃疡。 （一）形态及染色 G－中等大小杆菌，无芽孢、无荚膜、不运动。单独散在。美蓝染色可见异染颗粒，是本菌的形态特征。 （二）生长要求及培养特性