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细胞培养常见问题及其解决 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中 同样很容易生长。 总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、 RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开 始，其中美国 MP Biomedicals 公司提供了最全的培养基系列，例如 BME DMEM F10/F12 MEM RPMI1640 （液态/粉末）。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件 不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。 血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产 生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使 用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓 FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃 错误的使用字眼， 请不要再使用。 CS (calf serum) 则是指小牛血清。 HS (horseserum) 则是指马 血清。 6 培养细胞时应使用 5 % 或 10% CO2 ？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统， 而培养基中 NaHCO3 的含量 将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。 当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养 时应使用 10 % CO2 ；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时， 则应使用 5 % CO2 培养细胞。 7.Hanks 平衡盐溶液 (HBS) 要在空气中使用，不需要 CO2 培养箱。原因是什么？ Hanks 平衡 盐溶液 (HBS) 和 Earles 平衡盐溶液 (EBS) 有什么本质的功能差别？ HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平 ,在 Eagles (2.2g/L) 中比在 Hanks (0.35g/L) 中高。 碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。 Eagles 液在空气水平的 CO2 中，溶液 会变碱， Hanks 液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2 培养箱中保存组织，需要用 Eagles 液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用 Hanks 液就可以了。 MP Biomedicals 公司具有众多的平衡液， 8. 细胞之接种密度为何？ 依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。 细胞数太少或稀释的太多亦是造 成细胞无法生长之一重要原因。 9. 悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可， 若培养液太多时， 可将 培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培 养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤即可。 10.冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入 37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化， 并 注意水面不可超过冷冻