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PAGE PAGE 1 PCR产物分析 PCR产物分析对标本的纯度要求低，不需要分别病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可挺直用临床标本如血液、体腔液、洗漱液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。PCR产物是否为特异性扩增，其结果是否精确?????牢靠，必需举行严格的分析与鉴定，才干得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据讨论对象和目的不同而采纳不同的分析办法。 1) 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB（溴乙啶）染色，紫外仪下观看，初步推断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的全都，特殊是多重PCR，应用多对引物，其产物片段都应符合预计的大小，这是至少条件。琼脂糖凝胶电泳：通常应用1％-2％的琼脂糖凝胶，供检测用；聚丙烯酰胺凝胶电泳：6％-10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分别效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。2) 酶切分析：按照PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的酶切、电泳分别后，获得符合理论的片段，此法既能举行产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能举行变异性讨论。3）分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR产物碱基突变的有效办法。Southern印迹杂交：在两引物之间另合成一条寡核苷酸链（内部寡核苷酸）标志后做探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的敏捷度，还可知其分子量及条带外形，主要用于科研；斑点杂交：将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，观看有无着色斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。4）核酸序列分析：是检测PCR产物特异性的最牢靠办法。PCR产物电泳：将1-10μl PCR产物，与适量的上样缓冲液充分混匀后举行电泳。普通电流为l0mA、电压100V，电泳30min。电泳结束后，在紫外灯下观看，惬意的结果可举行扫描打印。