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1、 安装后首先打开 ImageJ:
2、 打开要分析图片: Fileopen (热键为 Ctrl+O )
3、 转换成 8bit 的灰度图: ImageType8-bit
4、 黑白反转(因为对于光密度( OD)来说越白数值越小,纯白为 0 ;越黑数值越大,纯黑理论上是无限
大。因此我们需要将上一步所转换的灰度图进行黑白反转,不然的话测出来的数值就会荧光越亮反而
数值越小):EditInvert (热键为 Ctrl+Shift+I )
5、 校正光密度(软件默认为测量灰度,因此我们要改为更加适用的光密度,其中原理不是一两句话能说
得清的,这里忽略) :AnalyzeCalibrate
在弹出来的界面的 Function 选择 Uncalibrated OD,并下界面左下方勾选 Global calibration ,然后
点击右下角的 OK
点击 OK后会跳出校正后的光密度曲线:
如不勾选 Global calibration ,光密度的校正只对这张图片有效,一般分析都要分析多张图片,所以
需要勾选,勾选后在打开另一图片时会提示是否将此校正应用于所有图片,不勾选 Disable Global
Calibration ,勾选 Disable these Messages
6、 选择测量单位(一般选择象素,如有明确的比例,也可以选择相应单位) :AnalyzeSet scale
点击后在弹出的界面里点击中间的 click to Remove Scale ,并勾选下面的 Global (同样的,如不选
Global 这个测量单位的选择只对这张图片有效) ,最后点击 OK
7、 选择测量项目: AnalyzeSet Measurements
在弹出界面中选择我们需要测量的项目 Area 、Integrated density ,并勾选下面的 Limit to threshold
(这个选项是指只测量我们选中的范围,如不勾选侧会测量整张图片数据) ,选择后点击 OK
8、选择测量域值: ImageAdjustThreshold (热键为 Ctrl+Shift+T )
滑动弹出界面中间的滑块选择适合的域值,以使的你图片中的细胞或待测目标刚好全部被选中,选好
之后点击右下角的 Set
在弹出来的界面点击 OK
9、 测量: AnalyzeMeasure (热键为 Ctrl+M 或直接按 M)
10、 记录数据并计算:
结果中的 Area 为选择范围的面积,如果是测量的是细胞的话就是细胞在图中的面积; IntDen 就是所
选范围的 IOD (光密度的总和)。
结果界面中的数据可以复制到 Excel 等软件中进行计算。
用 IntDen 的数值除以 Area 的数值得出来的就是这张图片中细胞的平均光密度,以这张图片的数据为
例,即: 18854/179252= (/pixel )
同法测量多张图的平均光密度值后就可以进行半定量比较。
以下附上分别应用 Image-Pro Plus 及 ImageJ 对五张图片进行分析的结果对比:
从结果的对比看来 ImageJ 与 IPP (Image-Pro Plus )的分析结果是基本一致的
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