血红蛋白的提取和分离.docx

波峰中学高二生物理班课前双基预习案 A（课前） 班级： 姓名： 编制: 陈芳 审核：赵玉春 审定： 编号： 【学习目标】 专题五 DNA 和蛋白质技术 课题 3 血红蛋白的提取和分离 (第 1 课时） 熟记凝胶色谱法、电泳法分离生物大分子的基本原理，了解缓冲液的组成及其作用； 掌握血红蛋白的提取和分离的基本过程和方法。 【完成目标 】目标一 原理 提取和分离蛋白质的原理：蛋白质的各种特性的差异：如分子的 、所带的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的 等，由此提取和分离各种蛋白质。 （一）凝胶色谱法 凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方 法。 原理：相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋 白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 具体过程： （ 1） （ 2） （ 3） （ 4） （ 5） 相对分子质量较小的蛋白质 凝胶颗粒 相对分子质量 孔较大的蛋白质 多 孔 板 A B 1 A． 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。 B．（1）蛋白质混合物 ； ） 开始，相对分子质量较小的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；相对分子质量较大的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外； ）相对分子质量较小的蛋白质被滞留；相对分子质量较大的蛋白质 移动。 ） 不同的蛋白质分子完全分开； ） 的蛋白质行程较短，已从层析柱中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。 （二）缓冲溶液 缓冲溶液的作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制 对溶液 pH 的影响，而保持 。 缓冲溶液通常由 1～2 种 溶解于水配制而成。调节 可以制成在不同 pH范围内使用的缓冲液。 【思考 1】维持人体血液 pH稳态的缓冲对有 。 （三）电泳 概念：电泳是指 在 的作用下发生 的过程。 原理：许多重要的生物大分子，如 等都具有可解离的基团，在一定的 pH 下， 这些基团会带上 。在电场的作用下，这些带电分子会向着和其 移动。 在电泳过程中，决定带电分子迁移方向的是带电分子 ，决定带电分子迁移快 慢的是带电分子 、电量的不同。 常用的电泳方法是 和 ，在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。为了消除样品分子原有净电量对迁移速率的影响，可以在凝 胶中加入 ，使样品分子的迁移速率完全取决于 。 波峰中学高二生物课后限时作业 B 基础题 1、下列有关叙述错．误．的是（ ） 用醋酸菌制作果醋时，需通入氧气 2 利用凝胶色谱法可分离相对分子质量不同的蛋白质 C．进行 DNA 粗提取时，用酒精提取含杂质较少的 DNA D．接种前需对培养基、培养皿、实验操作者的双手等进行灭菌处理2、关于蛋白质提取的叙述中，不正确的是 （ ） A．分离和纯化蛋白质之前首先要用适当的方法使蛋白质释放出来B．抽提时要依据蛋白质的不同特性选择不同的溶剂 C．蛋白质的粗提取物离心可除去一些小分子杂质 D．蛋白质的粗制品可能是多种蛋白质的混合物 3、下列有关生物技术实验的叙述，正确的是（ ） A．制作果酒和制作果醋所需的发酵底物、适宜温度等均相同 B．在植物组织培养过程中，制备的 MS培养基需要用酒精消毒 C．用二苯胺鉴定 DNA和用斐林试剂检测还原糖时均需要水浴加热 D．用凝胶色谱法分离蛋白质时，和分子量较小的蛋白质相比，血红蛋白移动较慢 4、下图能正确表示相对分子质量不同的蛋白质，在凝胶中的行进过程的是 ( ) 5、下列对红细胞和血红蛋白的描述，错误的是 ( ) A．哺乳动物成熟的红细胞可用于制备细胞膜和提取血红蛋白的生物材料 B．血红蛋白属于细胞外液的成分，其组成元素有 C、H 、O、N、Fe C．血红蛋白的纯化可用凝胶色谱法，其原理是根据相对分子质量大小分离蛋白质D．蛙的红细胞可进行无丝分裂，其特征是没有出现纺锤丝和染色体的变化 6、在血红蛋白的提取过程中，要使用磷酸缓冲液处理的作用是 ( ) 防止血红蛋白被氧气氧化 血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D.让血红蛋白处在稳定的 pH 范围内，维持其结构和性质 7、下列关于提取和分离蛋白质的步骤正确的是 ( ) A. 样品处理、凝胶色谱操作、 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳B.样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C.样品处理、粗分离、纯化、纯度