紫外分光光度法测定苯甲酸含量参考.pdfVIP

紫外分光光度法测定苯甲酸含量 一、实验目的 1． 了解紫外分光光度法基本原理并学会紫外分光光度计的使用操作 2．掌握吸收标准曲线的绘制方法及样品含量的测定方法 二、基本原理 研究物质在紫外、 可见光区的分子吸收光谱的分析方法称为紫外 - 可见分光光度法。 紫外 —可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收 200～800 nm 光谱区的辐射来进行分析测定的 方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于 无机和有机物质的定性和定量测定。 物质对辐射的吸收遵循朗伯 -比尔定律。当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度 (A) 与溶液的浓度 (C) 和厚度 (b) 的乘积成正比， 这个定律通常称为朗伯－比尔定律。 它是 分光光度法定量分析的依据，适用于能量不同的各种电磁辐射，也适用于稀溶液、气体和均 质固体。 含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。未知结构不同对紫外及可见光 的吸收曲线不同。 苯甲酸及其盐对紫外光有选择性吸收， 其吸收光谱的最大吸收波长在 225nm 左右。 三、仪器与试剂 1．仪器： UV-2401PC 紫外可见分光光度计 日本岛津 1cm石英比色皿： 2 个；容量瓶：50mL，11 只；500ml，1 只；250ml，1 只；移液管： 10ml、 20ml、 25mL 各 1 支； 2 ．试剂 ① 1mg/ml 苯甲酸储备液：称取 0.5 克苯甲酸，加水加热溶解，用水稀释至 500ml，摇匀后 备用。 ②取苯甲酸储备液 25.00ml ，置于 250ml 容量瓶中，用水稀释至 250ml，摇匀后备用。此 标准溶液含苯甲酸 100 μg/ml 。 四、实验步骤 1．标准溶液的配制 取 50mL 容量瓶 10 只，分别加入 100 μg/ml 的苯甲酸溶液 1.00ml、2.00ml、3.00ml 、4.00 1 ml、5.00 ml、6.00 ml、7.00ml、10.00 ml、20.00 ml、30.00 ml，用去离子水稀释至刻度，摇匀 后备用。 2．测定波长的确定 测定条件：氢灯， 1cm石英比色皿，空白溶液为参比，以苯甲酸标准溶液为测定溶液。 ① 开启电脑和紫外分光光度仪，启动软件进行检测。设置参数：扫描波长从 210nm 到 240nm止，狭缝宽度为 1.0nm，吸光度记录范围从 0 到 1.0 。 ②将参比池和样品池各放一只 1cm石英比色皿，比色皿中装空白溶液，然后进行基线调 零。 ③以空白溶液为参比， 4.00 ml 的苯甲酸标准溶液为测定溶液，开始扫描。以苯甲酸浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收标准曲线。扫描得到最大吸收波长 λmax 确定为测定波 长。 3、吸收标准曲线的绘制 用 1cm 石英比色皿， 以空白溶液为参比， 测定 1.00ml、2.00ml、3.00ml 、4.00 ml 、5.00 ml 、 6.00 ml 、7.00ml、10.00 ml、20.00 ml、30.00 ml 苯甲酸标准溶液在 λmax 处的吸光度，以及未 知样品的吸光度。以苯甲酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收标准曲线。根据绘制的 吸收标准曲线，求取标准曲线线性回归方程。 五、 实验记录、数据处理及结果计算 实验序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 苯 甲 酸 标 准 溶 液 体 积 1 2 3 4 5 6 7 10 20 30 未知样品