基因的重组与转移.pptxVIP

;外源DNA;;第一节 重组DNA分子的构建;二、基因重组的考虑因素;三、表达载体DNA理想的酶切位点;（一）粘性末端的连接;;;;ligase;;（1）同聚加尾法 ;;用T4 DNA连接酶连到平端DNA上，然后再用酶切，形成一个人工粘性末端。;;;④缺点：;;;;接头与接头会彼此以粘性末端接在一起，影响与DNA片段的连接。;5‘p-GATCCCGG-OH HO-GGCC-P;;;;GCTAGCCGG;;;;;EcoRI;;;;（4）使用同尾酶产生的粘性末端连接方法;1. 载体自身环化连接（能存活）;17;1. 目的;使用丧失了限制体系的大肠杆菌； 具有与重组体互补的遗传性状； 重组整合缺陷型。;;用低渗CaCl2溶液在低温时处理快速生长的细菌，此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面，促进细胞对DNA的吸收。 ;;;2. 转化率;4. 转化方法 ;50ng载体DNA;LB培养受体菌至OD600;;环形重组质粒 质粒自我连接;①生长状态;把重组的噬菌体?DNA或Cosmid质粒DNA包装成具有感染能力的?噬菌体颗粒。;;cI857基因是个温度敏感性阻遏蛋白基因，感染细菌后，在32℃下培养细菌时能够保持溶源性。 但当温度升高到44℃—45℃时，就会导致cI基因编码的阻遏蛋白失活，?DNA复制、外壳蛋白合成。便于提取外壳蛋白。;cI857;;;体外包装好的重组噬菌体感染受体菌，使受体菌发生溶菌，形成噬菌斑。（每?g ?DNA能形成106噬菌斑）。;;植物细胞;又称高速微型子弹射击法（High-velocity microprojectiles);9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。7月-217月-21Thursday, July 22, 2021 10、低头要有勇气，抬头要有低气。20:22:0420:22:0420:227/22/2021 8:22:04 PM 11、人总是珍惜为得到。7月-2120:22:0420:22Jul-2122-Jul-21 12、人乱于心，不宽余请。20:22:0420:22:0420:22Thursday, July 22, 2021 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。7月-217月-2120:22:0420:22:04July 22, 2021 14、抱最大的希望，作最大的努力。22 七月 20218:22:04 下午20:22:047月-21 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。七月 218:22 下午7月-2120:22July 22, 2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/7/22 20:22:0420:22:0422 July 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。8:22:04 下午8:22 下午20:22:047月-21;9、 人的价值，在招收诱惑的??瞬间被决定。7月-217月-21Thursday, July 22, 2021 10、低头要有勇气，抬头要有低气。20:22:0420:22:0420:227/22/2021 8:22:04 PM 11、人总是珍惜为得到。7月-2120:22:0420:22Jul-2122-Jul-21 12、人乱于心，不宽余请。20:22:0420:22:0420:22Thursday, July 22, 2021 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。7月-217月-2120:22:0420:22:04July 22, 2021 14、抱最大的希望，作最大的努力。22 七月 20218:22:04 下午20:22:047月-21 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。七月 218:22 下午7月-2120:22July 22, 2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/7/22 20:22:0420:22:0422 July 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。8:22:04 下午8:22 下午20:22:047月-21