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专题基因工程 第一页，共37页 （一）基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 原理 基因重组 第二页，共37页 限制性内切酶 1.特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。 2.分布：主要在微生物中。 3.结果： 产生黏性末端（碱基互补配对）或平末端 。 4.举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 第三页，共37页 DNA连接酶的种类： 根据酶的来源不同，可分为两类： （1）E.coliDNA连接酶： 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来 （2）T4DNA连接酶： 既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以双链DNA片段的平末端 第四页，共37页 运载体 1.作用： 2.条件： 3.种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 4.质粒的特点 　　要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 将外源基因送入受体细胞。 第五页，共37页 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 第六页，共37页 大肠杆菌的质粒： （二）基因操作的工具 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 第七页，共37页 质粒的特点 1.细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2.质粒的存在对宿主细胞无影响； 3.质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 第八页，共37页 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 补：原核细胞的基因结构 第九页，共37页 ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。 第十页，共37页 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 补：真核细胞的基因结构 第十一页，共37页 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 第十二页，共37页 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 思考: 第十三页，共37页 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指: 编码蛋白质的结构基因 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）人工合成 （3）利用PCR技术扩增 第十四页，共37页 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 1.基因文库 (一)从基因文库中获取目的基因 第十五页，共37页 基因组DNA文库 限制性内切酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 1)基因组文库 (Genomic library) 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因 和保存某种生物的全部基因。 第十六页，共37页 2)cDNA文库 (cDNA library) ： 是指将某种生物体基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段