细胞热位移分析的具体方法及步骤.docxVIP

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2022-03-02 发布于江苏
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细胞热位移分析的具体方法及步骤.docx

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细胞热位移分析的具体方法及步骤细胞热位移分析(CETSA)是基于配体诱导热稳定的生物物理原理把蛋白的分离。能量的耦合配体结合和受体熔化反应导致这种稳定性现象。细胞提取物被分为两个部分。磷酸盐溶液这种化合物在磷酸盐中的溶液缓冲盐水 (PBS)/二甲基亚砜 (DMSO)或 PBS/ DMSO 单独作为载体(制程: 加入到最后 1%的 PBS/DMSO 浓度。然后，对两组进行分组 37°C 软化 40 分钟。孵化后，两种每组分为四部分，置于 0.2 m 中 PCR 管，每管含 100 μL。一个样本含有化合物，一个样品作为对照; 同时加热 3min 至设定温度(温度分别为 41、45、49 和 53℃)，然后在室温下培养 3 分钟。随后，提取液在 12,000×g离心 20 分钟在 4°C。收集上清; con - 蛋白质的浓度由 BCA 法测定蛋白。 SDS 凝胶电泳分离样品制备用于质谱分析或免疫印迹分析细胞溶解。对于等温剂量反应(ITDR)实验- MCL 作为 6 点连续稀释试验 (800μM, 400μM, 100μM, 10μM,1 μM, 0μM) 按照以上步骤进行实验提取。