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注意:1.准备好 70℃水浴锅。
所有的离心操作都在室温下(15-25℃),14000 转/分钟
用 Buffer AL 和 InhibitEX Buffer 溶解任何沉淀都要加热和混匀。AW1 和 Buffer AW2 都加乙醇。
5.使用之前混合所有缓冲液。
称取 200ul 样品在 2ml 的离心管中,离心管放在冰上。
每个样品添加 1ml InhibitEX Buffer,然后持续旋涡混合 1min 或者直到样品混合均匀。
在 70℃加热悬浮液 5min(难以溶解的细胞溶解温度可以提高到 95℃),然后旋涡混合 15s。
离心样品 1min 析出沉淀。
另取离心管加 15ul Proteinase K。
移取 200ul 步骤 4 的上清液至含 Proteinase K 的离心管中。
然后添加 200ul Buffer AL,旋涡混合 15s。(注意:不要直接添加 Proteinase K 到 Buffer AL 中,样品和 Buffer AL 必须充分混合成均匀混合液)
70℃孵育 10min。
添加 200ul 乙醇到溶解液中,旋涡混合。
小心移取 600ul 步骤 9 的裂解液到 QIAamp 旋转柱中,盖上盖子,离心 1min。把 QIAamp 旋转柱放到一个新的 2ml 的收集管中,丢掉含有滤液的管。
小心打开 QIAamp 旋转柱,添加 500ul Buffer AW1,离心 1min。把 QIAamp 旋转柱放到一个新的 2ml 收集管中,丢掉包含滤液的收集管。
小心打开 QIAamp 旋转柱,添加 500ul Buffer AW2,离心 3min,丢掉包含滤液的收集管。
把 QIAamp 旋转柱放到一个新的 2ml 的收集管中,丢掉旧的含有滤液的收集管,离心 3min。
把 QIAamp 旋转柱放到一个新的的离心管,直接移取 200ul Buffer ATE 到QIAamp 薄膜上。室温孵育 1min,然后离心 1min 洗提 DNA。通过UV 吸收度判断 DNA 纯度,使用 Buffer ATE 做空白设计避免结果错误。
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