核酸探针标记.pptVIP

第9章 核酸探针标记（label of nuclei acid probe ） ;一、探针的类型;二、探针的标记物;（一）? 放射性标记物 ----放射性核素;1、常用的放射性核素;2、放射性标记物的优缺点;二）非放射性标记物;2、常用的标记物;生物素化的核苷酸和光敏生物素;2）地高辛甙元;三、探针的标记方法;（一）缺口翻译法或切口平移（nick translation）;缺口翻译法的原理;缺口翻译法的特点;（二）随机引物法（random　priming );随机引物法标记的原理;5‘;随机引物法的特点;(三）末端标记法;(三）末端标记法;三、探针的标记方法;第10章 核酸分子杂交(nucleic acid hybridization);一、膜固相印记杂交;（二）杂交的基本过程：;１、变性（Denaturation);２、杂交（hybridization);建立杂交条件需要考虑的因素;３、洗膜;4、杂交信号的检测;地高辛标记探针的检测;生物素标记探针的检测;（三）膜固相杂交的类型;２、Southern 印迹杂交(Southern blot)：　　;吸水纸;3|、 Northern印迹杂交(Northern blot)：;二、组织、细胞的原位杂交;三、菌落与噬菌体斑的原位杂交;第11章 PCR技术的原理和应用;一、常规多聚酶连反应;5’;（二）PCR 的特点;（三）影响ＰＣＲ的因素;PCR引物的设计;引物的设计;二、反转录PCR（Reverse transcription PCR，RT-PCT);AAAAAAA-3’;三、荧光实时定量PCR(fluorescence Quantified real time –PCR);??? 实时荧光定量PCR原理;1.??Ct 值的定义;Ct值的确定;2.??荧光域值（threshold）的设定;3.? Ct值与起始模板的关系;荧光定量标准曲线;4.? 荧光化学;1）TaqMan荧光探针：;TaqMan 荧光探针工作原理;2）SYBR荧光染料;传统定量PCR方法： PCR－ELISA法;缺点--重现性差; 图4. 相同模板在同一台 PCR仪上进行96次扩增的扩增曲线图 终点处检测产物量不恒定；Ct值则极具重现性 ;四、梯度PCR;五、巢式PCR（nested PCR）;长PCR（Long range PCR）;64