海洋生物技术：紫外分光光度法测定蛋白质的含量.docVIP

PAGE 课程名称 海洋生物技术 教学内容 （项目) 实训四 紫外分光光度法测定蛋白质的含量 授课进度 第七,八次授课 教学日期 及课节 第七,八周 星期三第 1-4 节 共（4）学时 教学地点 2-405 教学目标 掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。 教学重点 掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。 教学难点 掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。 学情 在蓝色经济与海洋+背景下，学生们对海洋生物技术很感兴趣。 教学设计 教学环节 时长 （分钟） 教学过程及内容设计 教学方法 学习任务一 45分钟 一 原理 蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。但此方法存在以下缺点： 1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。 2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。 二 器材与试剂 材料：1．标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白0.5克，配制成浓度为1mg/mL的溶液500毫升(250毫升*2)。 2．待测蛋白溶液：酪蛋白稀释溶液(以0.01N NaOH作溶剂)，使其浓度在标准曲线范围内；鱼肉蛋白液；卵清蛋白液（卵清蛋白溶液：取5ml鸡蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤,新鲜配制）等。仪器：1．紫外分光光度计 2．移液管1毫升,5毫升;微量加样枪与枪头1毫升规格 3．试管及试管架(每人1套,10支试管) 4．石英比色皿 5. 容量瓶250毫升,试剂瓶4个 演示法；讨论法；操作法 学习任务二 细胞活力测定 30分钟 三 实训步骤 1．标准曲线的制作 按表1加入试剂。 表1 标准曲线的制作 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 牛血清白蛋白溶液/mL 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 蒸馏水/mL 4 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0 蛋白质浓度/（mg/mL） 0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.00 A280 混匀后, 选用1cm的石英比色皿，在波长280nm处测定各管的吸光值。以蛋白质的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。 2．未知样品的测定 取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。 多媒体教学；讲授法 交流总结 15分钟 四 思考：蛋白质含量测定的注意事项。 各个实训小组间交流实训结果，讨论心得体会。 讲授法；讨论法 教学意见及建议： 《海洋生物技术》是一门理实一体化的专业课程，采用多媒体教学、讲授法、研讨法、直观教学。采用工作任务驱动，项目导向的案例教学法，引导式教学法体现在实训设计中，分小组制定学习任务，有意识地培养学生的团队合作精神，强调组内合作，资源共享，成果共享。 授课教师签字： 提示：请您根据《课程标准》、《课程教学进度表》在上课前完成教案，并在上课前做好教学仪器设备准备和课后CRP教室日志的填写工作。