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实验十 血糖的测定 实验十血糖的测定 实验10血糖的测定 实验十血糖的测定 血液中的葡萄糖称为血糖。正常人的血糖浓度相对恒定，维持在3.9 mmol/L至6.1 mmol/L之间。相对恒定的血糖浓度是身体正常生理活动的前提条件之一，具有双重现实意义：第一，维持稳定的能量供应，以满足身体在各种生理状态下的能量需求。第二，确保身体不会因进食导致血糖浓度过高而损失糖分。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、 葡萄糖氧化酶法 1.了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。2.掌握血糖测定的临床意义。【原理】 葡萄糖氧化酶（God）能将葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶（POD）作用下分解为水和氧，将无色的4-氨基安替比林与苯酚氧化缩合形成红色醌类化合物，即Trinder反应。在一定范围内，颜色深度与葡萄糖浓度成正比。在505nm波长处测量吸光度。与标准管相比，可计算血糖浓度。反应式如下： 葡萄糖+o2+2h2o 2h2o2 2h2o2+4-氨基安替比林+酚 红醌化合物 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】 1.0.1mol/l磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/l氢氧化钠（或1mol/l盐酸）调节ph至7.0，然后用蒸馏水稀释至1l。2.酶试剂 称取1200u过氧化物酶、1200u葡萄糖氧化酶、10mg 4-氨基安替比林和100mg叠氮化钠，溶于80ml磷酸盐缓冲液中，用1mol/LNaOH调节pH至7.0，加入磷酸盐缓冲液至100ml。 置冰箱保存，4℃可稳定3个月。3.酚溶液 称取重蒸馏苯酚100mg，溶于100ml蒸馏水中（苯酚在空气中易氧化成红色，可先配制成500g/l溶液，储存在棕色瓶中，使用时稀释），储存在棕色瓶中。4.酶酚混合试剂 取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。5.12mmol/l苯甲酸溶液 将1.4g苯甲酸溶解于约800ml蒸馏水中，加热以帮助溶解，冷却后加入蒸馏水至1L。6.葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/l苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/l苯甲酸溶液加至100ml。 7.葡萄糖标准应用溶液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml于100ml容量瓶中，加12mmol/l苯甲酸溶液至刻度。【操作】 取3根试管，编号，按下表操作。 表3-12血糖测定操作步骤 添加（ML）血糖标准溶液蒸馏水-酶-酚混合物 混匀，置37℃水浴中保温15分钟，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 血糖（mmol/L）×5标准管吸光度 空白管－－0.023.0 标准管道-0.02-3.0 测定管0.02－－3.0 血糖（mmol/L）= 标准管吸光度测定管吸光度 1.如果测定结果超过20mmol/L，则在测定前用生理盐水稀释样品，并将结果乘以稀释倍数。 2．若酶酚混合试剂呈红色，应弃之重配。因标本和标准用量少，其加量是否准确对测定结果影响较大，故其加量必须准确。 3.God-POD法第一步特异性高，而POD催化的指示剂反应第二步非特异性强，易受样品中尿酸、维生素C、谷胱甘肽、胆红素等还原性物质干扰。这些物质与显色剂H202竞争，导致测定结果较低。 4．trinder反应由trinder于1969年提出。后经许多学者改进，采用2，4-二氯酚、2-羟-3，5-二氯苯磺酸等代替苯酚，由于这些化合物氧化生成的色素的摩尔吸光系数均高于苯酚，使反应灵敏度得以提高。 [正常参考范围]3.9~6.1mmol/l[临床意义] 1.生理性高血糖可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。2.病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 ⑵对抗胰岛素的激素分泌过多：如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等。 （3） 颅内压升高：颅内压升高（如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等）刺激血糖中枢，