奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法.ppt

GB/T22388奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法 2016.02.29 1 性质 三聚氰胺：别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量：126.12 物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味； 相对密度：1570kg/m³ ； 熔点：在常压下，354℃分解； 升华温度：300℃； 溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性 化学性能 三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂 三聚氰胺检测原理（LC/MS/MS） 标准中：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法 本实验室用0.2 mol/L高氯酸溶液提取，增加了“样品经0.2 mol/L高氯酸溶液提取后加入10 mL二氯甲烷萃取”,离心，取上层过柱，内标法定量，固相萃取净化步骤同标准。 检出限 HPLC/MS/MS：0.01 mg/kg HPLC:2mg/kg 检测流程： 称样2.00 g, 准确加入0.2 mol/L高氯酸溶液9.8 mL、0.2 μg/mL三聚氰胺内标溶液0.2 mL，均质，加入10 mL二氯甲烷，振荡，4000r/min 离心5分钟，准确移取5 mL上清液过混合性阳离子交换固相萃取柱（用前用3 mL甲醇、3 mL水活化），分别用3mL水和3mL甲醇淋洗柱子，再用3.0 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于50 ℃氮气吹干，准确加入乙腈+水（9+1）2.0 mL，涡旋振荡，洗脱液用0.25 μm微孔滤膜过滤，上机测定。 流程图 标准曲线配制 曲线 工作液 移取体积（mL） 稀释至 10 mL 浓度（ng/mL） 0.1μg/mL 0.2 2 0.5 5 1.0 10 2.0 20 内标0.2ug/mL 0.5 10 曲线浓度 2、5 、10 、20ng/mL(各含内标10.0 ng/mL) 3．色谱条件 Time(min) 0.0 1.0 2.0 4.5 4.6 8.0 A% 95 95 50 50 95 95 仪器型号：Agilent 1200-6410 LC/MS (08JL016) 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH HILIC 1.7 μm 流速：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：5 μL； 流动相：A醋酸铵水B乙腈；梯度洗脱； Iron Source：ESI+；Capillary：4kV； Fragmentor：105；delta EMV：300； Gas Temp：110 ℃； Gas Flow：11L/hr； Nebulizer: 35psi。 注意事项 每批检测样做样顺序为试剂空白、样品空白、样品加标、样品。 加标回收：移取0.2 mL，0.1 μg/mL标准溶液至样品中，相当于0.01 mg/kg添加水平，加入0.2mL 0.2 μg/mL内标工作液，初测加标要选同等基质的样品做空白，样品复测做平行样，复测时如没有同等基质的空白样品则直接在样品中加标，加标量为初测时样品中的含量3倍，且加入内标量也应与三聚氰胺含量相当，样品提取液在过固相萃取柱之前稀释到合适的范围，取稀释液过固相萃取柱，且应保证最终上机工作液中内标的含量为10.0ng/mL . 检测结果无需校正回收率，检测结果应减去试剂空白。 每次检测结果应与标准谱图对照，如相同浓度标液峰面积偏差较大，应及时查找原因；