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家兔DGAT1基因的克隆及其组织表达谱分析 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“基础医学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文9519字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：家兔DGAT1基因的克隆及其组织表达谱分析 1 1 材料与方法 3 2 结果与分析 4 3 讨论与结论 6 文2：浅论大肠杆菌MnSOD基因的克隆及表达 7 1 材料和方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 家兔DGAT1基因的克隆及其组织表达谱分析 文1：家兔DGAT1基因的克隆及其组织表达谱分析 二酰基甘油酰基转移酶（diacylglycerolacyltraferase，DGAT）是脂肪细胞中甘油三脂合成过程中最后一步反应的关键酶，在细胞甘油脂类的代谢中起重要作用，其作用机制是使二酰基甘油（diacylglycerol，DAG）作用于脂肪酸酰基形成三酰甘油（triacylglycerol，TAG）[1]。研究表明，DGAT基因对动物肌肉和乳汁中脂肪含量以及脂肪酸组成有显著影响，敲除DGAT1基因的小鼠虽然在肠内能继续合成甘油三酯，但不能在组织中沉积，也不能泌乳[2-6]。DGAT有2种类型：DGAT1和DGAT2，两者有54%的同源性，但是分属于不同的基因家族。DGAT1属于包括酰基辅酶A、胆固醇酰基转移酶ACAT1和ACAT2在内的蛋白家族，在很多组织中都有表达，特别是在小肠、睾丸、脂肪、乳腺和皮肤中的表达量最高[7]。在小鼠上研究表明DGAT1的表达量与小鼠的肥胖程度及脂肪组织和骨骼肌中脂肪酸的含量及成分有关[8-9]。在牛上研究发现DGAT1基因的K232A突变对奶牛产奶性状，尤其是乳脂量具有显著影响[10，11]。Wu等研究结果表明，DGAT1基因对牛的皮下脂肪有加性效应[12]。猪上的研究表明，DGAT1基因定位在SSC4p15，在这一区域内存在可能影响猪生长速度、肌内脂肪含量和脂肪酸组成的QTL[13-14] 关于DGAT1基因的定位和结构，国内外学者在许多物种上进行了深入细致的研究。人的DGAT1基因定位于，DNA总长度10 588 bp，含有17个外显子和16个内含子。小鼠的DGAT1基因位于15号染色体D3区，遗传位置是 cM，含有17个外显子，16个内含子。牛DGAT1基因位于14号染色体19 cM处，与微卫星CSSM66紧密连锁，基因全长14 117 bp，含有17个外显子和16个内含子。猪DGAT1基因定位于SSC4p15，与微卫星SW2404紧密连锁，cDNA全长1 935 bp[15-16]。目前，在家兔（Oryctolagus cuniculus）DGAT1基因研究方面，仅见 GenBank 上其基因预测序列的公布，有关家兔该基因的表达尚属空白。本研究旨在通过RT-PCR技术对齐兴肉兔DGAT1基因的cDNA进行克隆，并利用半定量RT-PCR 技术分析DGAT1基因在不同组织中的表达规律，为该基因在家兔肌肉组织脂质代谢中的功能研究提供基础资料。 1 材料与方法 材料 动物及组织样本采集 选取成年健康齐兴肉兔公兔5只，来自四川省畜牧科学研究院种兔场。屠宰后立即采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、盲肠、淋巴结、背最长肌、皮下脂肪等组织样品置于液氮中速冻，-80 ℃保存备用。 主要仪器及试剂 电动匀浆器（瑞士Polytron PT1200E）、Power Pac 3000电泳仪（Bio-Rad）、日本日立CR22g高速冷冻离心机、英国Biochrom公司的WPA Biowave核酸蛋白检测仪、Vea Doc 1000凝胶成像系统（Bio-Rad）。主要试剂包括Trizol试剂（Invitrogen）、反转录试剂盒（Ferments）、pMD19-T质粒（TaKaRa）等。 方法 引物设计 根据GenBank中家兔DGAT1预测序列以及GAPDH mRNA序列，并采用Primer Premier 软件设计针对DGAT1基因的特异性克隆引物以及半定量RT-PCR引物（表1），引物均由上海生物工程有限公司合成。 总RNA提取与cDNA模板合成 采用Trizol试剂法提取10种组织中的总RNA，用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量和完整性，质量合格的RNA置于-80 ℃冰箱冻存备用。RNA反转录成cDNA模板参照TaKaTa公司PrimeScriptTM RT reagent Kit试剂盒说明，反转录产物 -20 ℃ 保存备用。