微生物的培养方法 (2).pptVIP

第30页，共59页，编辑于2022年，星期日 微好氧微生物采取穿刺培养 第31页，共59页，编辑于2022年，星期日 对厌氧菌培养必需创造更严格的无氧环境 厌氧培养皿。厌氧罐，Hungate滚管技术 第32页，共59页，编辑于2022年，星期日 第33页，共59页，编辑于2022年，星期日 第34页，共59页，编辑于2022年，星期日 第35页，共59页，编辑于2022年，星期日 生产中常见的固体培养 在生产实践中，好氧真菌的固体培养方法都是将接种后的固体基质薄薄地摊铺在容器的表面，可使菌体获得充足的氧气，又可以将生长过程中产生的热量及时释放。 固体培养使用的基本培养基原料是小麦麸皮等。灭菌后待冷却到合适温度便可接种。固体培养基中的含水量控制在40％～80％之间（典型的液体培养基含水量在95％以上），细菌和酵母菌将无法忍受如此低水含量的环境，所以，固体培养被细菌或酵母菌污染的可能性大大降低。 麸曲、食用菌、酱豆、米酒 第36页，共59页，编辑于2022年，星期日 第37页，共59页，编辑于2022年，星期日 米曲霉固体培养生产日本酒曲 第38页，共59页，编辑于2022年，星期日 2.液体培养 液体培养就是将微生物接种到液体培养基中进行培养。由于大多数发酵微生物是好氧性的，而且微生物只能利用溶解氧，所以，如何保证在培养液中有较高的溶解氧浓度至关重要。一般可通过增加液体与氧的接触面积或提高氧分压来提高溶氧速率。 第39页，共59页，编辑于2022年，星期日 实验室常见的液体培养 在实验室进行好氧菌液体培养的方法主要有四种。 （ 1）试管液体培养 此法的通气效果一般较差，仅适用于培养兼性好氧菌，以及进行微生物的各种生理生化试验。 （2）浅层液体培养 在三角烧瓶中装入浅层培养液，其通气量与装液量、棉塞通气程度密切相关。通气量对微生物的生长速度和生长量有很大关系，该方法一般也仅适于兼性好氧菌。 第40页，共59页，编辑于2022年，星期日 （3）摇瓶培养 盖8～12层纱布或用疏松的棉塞塞住以阻止空气中杂菌或杂质进入瓶内，而空气可以透过纱布或棉塞供微生物呼吸之用。 一般装液量为三角瓶的 10％以下，如 250ml三角瓶装 10～20ml培养液。 三角瓶内设置挡板或添加玻璃珠等。将摇瓶放在摇床上以一定速度保温振荡培养，摇床有旋转式和往复式两类。 摇瓶培养在实验室里被广泛用于微生物的生理生化试验、发酵和菌种筛选等，也常在发酵工业中用于种子培养。 第41页，共59页，编辑于2022年，星期日 第42页，共59页，编辑于2022年，星期日 第1页，共59页，编辑于2022年，星期日 从历史发展的角度来看，微生物培养技术的发展主要有以下特点： ①从少量培养发展到大规模培养； ②从浅盘培养发展到厚层固体或深层（液体）培养； ③从以固体培养为主发展到以液体培养为主； ④从静止式液体培养发展到通气搅拌式液体培养； ⑤从分批培养发展到连续培养以至多级连续培养； ⑥从游离的微生物细胞培养发展到利用固定化细胞培养； ⑦从单一微生物培养发展到混合微生物培养； ⑧从利用野生菌种发展到利用变异菌株以及“工程菌”。 第2页，共59页，编辑于2022年，星期日 一、投料方式 1、分批培养 2、连续培养 3、补料分批培养 二、培养状态 1、固体培养 2、液体培养 三、氧气 1、厌氧 2、好氧 四、菌种的数量 1、纯种培养 2、混菌培养 根据微生物种类、培养目的和要求、规模和资金投入的不同可以有不同形式的培养装置。 第3页，共59页，编辑于2022年，星期日 一、投料方式 1、分批培养 细菌、酵母、霉菌的生长曲线 一次性投料，一次性收获 第4页，共59页，编辑于2022年，星期日 第5页，共59页，编辑于2022年，星期日 延滞期 少量细菌接种到新鲜培养基后，一般不立即进行繁殖，生长速度近于零。因此在开始一段时间，细菌数几乎保持不变，甚至稍有减少。这段时间被称为延迟期，又称为迟缓期、调整期或滞留适应期。 （1）延滞期出现原因 （2）延滞的特点 （3）影响延滞期限长短的因素 （4）缩短延滞期的意义及方法 第6页，共59页，编辑于2022年，星期日 A、微生物接种到一个新的环境，暂缺乏足够的能量和必需的生长因子； B、“种子”老化（即处于非对数生长期）或未充分活化。 C、接种时造成的损伤 （1）延滞期出现原因 第7页，共59页，编辑于2022年，星期日 （2）延滞期的特点 特点： 1）生长速率常数为零； 2）细胞形态变大或增长，许多杆菌可长成丝状。.细菌数量不增加或增加很少，代谢活跃； 3）细胞内RNA，尤其是rRNA的含量很高，细胞的嗜碱性强； 4）合成代谢十分活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加速，易