复发性自然流产患者蜕膜巨噬细胞中Siglec11的表达及两者相关性分析.docVIP

复发性自然流产患者蜕膜巨噬细胞中Siglec11的表达及两者相关性分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：复发性自然流产患者蜕膜巨噬细胞中Siglec11的表达及两者相关性分析 1 1、资料与方法 2 2、结果 5 2组患者蜕膜组织中Siglec-11在转录组水平上的比较 5 3、讨论 6 文2：FasFasL系统在RSA患者蜕膜与绒毛组织的表达及临床意义 7 1资料与方法 8 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 复发性自然流产患者蜕膜巨噬细胞中Siglec11的表达及两者相关性分析 文1：复发性自然流产患者蜕膜巨噬细胞中Siglec11的表达及两者相关性分析 复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion，A)是妊娠常见并发症，发生率约为1%，其中50%以上患者不存在染色体、解剖、内分泌、自身免疫异常和生殖道感染等常见病因，临床上称之为原因不明复发性流产，其发病机制不清楚，缺乏有效的治疗方法。生殖免疫学研究认为母胎免疫耐受异常可能是其发病机制之一[1] 免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-like lecti，Siglecs)家族是表达于各种免疫和造血细胞表面的一类免疫球蛋白粘附分子，通过识别含有唾液酸的糖链结构促进细胞与细胞的相互作用，介导细胞信号的转导，调节免疫细胞和造血细胞的功能。近年来的研究发现，其在免疫调节和炎症反应中发挥重要的作用，并且还有介导胞吞作用病原体识别等功能[2，3，4] Siglec-11是公认的粘附分子，介导唾液酸与细胞的结合，与多糖配体特异结合以减少炎症反应的发生。在免疫应答中，配体通过SH2结构域募集细胞质磷酸酶诱导酪氨酸磷酸化，而Siglec-11作为其抑制性受体，通过信号分子的去磷酸化阻断信号通路。Siglec-11主要在人体内各种组织中的巨噬细胞中表达，在巨噬细胞介导的免疫应答中起重要作用[5，6]。本研究分析A妇女与人工流产妇女蜕膜组织中巨噬细胞Siglec-11的表达差异，初步探讨Siglec-11在蜕膜巨噬细胞的调控及A中的作用。 1、资料与方法 研究对象 选取2018年1月—2018年12月上海市第一妇婴保健院门诊84例A患者为A组，患者自然流产连续发生3次或3次以上，常规进行病因筛查;排除夫妻染色体、解剖、内分泌、感染因素及自身免疫性疾病，排除胎儿染色体芯片结果异常的病例;A组年龄(±)岁，胎龄(±)d，体重指数(±)。同期要求人流的正常妊娠妇女84例为对照组;妊娠期间无阴道异常出血，B超检查提示胚胎发育正常;正常妊娠组年龄(±)岁，胎龄(±14)d，体重指数(±)。2组年龄、胎龄、体重指数基线资料比较差异无统计学意义。所有样本在采集和使用前均与患者签署知情同意书，研究经医院伦理委员会批准。 方法 正常早孕妇女和A患者于人流术前抽取无抗凝血，离心分离血清，-80℃保存。于人流术中无菌取蜕膜组织，用生理盐水清洗，取 cm× cm×1 cm的组织3块，分成3管置于液氮中保存。用于提取总RNA和蛋白质，另取约2 cm×1 cm×1 cm的蜕膜组织，浸泡于福尔马林中过夜，制作石蜡包埋组织及芯片。 切片，烤片，二甲苯溶蜡，酒精梯度水化。柠檬酸修复液煮沸修复，自然冷却，自来水冲洗，滴加3%的H2O2蒸馏水溶液，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS浸洗，血清或BSA封闭，一抗(abcam106390)按1:100稀释，4℃过夜孵育，次日PBS浸洗，每张切片滴加二抗工作液(HRP 1∶100)，37℃温箱孵育30 min。PBS浸洗，DAB(SignalStainDAB Substrate Kit)(CST，#8059)显色，镜下观察，抗体标记的阳性部位准确终止显色。苏木素复染，1%酸酒精分化，自来水冲洗，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。 烤片，二甲苯溶蜡，酒精梯度水化。柠檬酸修复液煮沸修复，自然冷却，PBS浸洗，血清或BSA封闭，一抗(abcam106390)按1∶100稀释，4℃过夜孵育，次日PBS浸洗，滴加荧光二抗工作液(abcam150115 1∶1 000)，常温孵育1 h。PBS浸洗，每张切片滴加FITC标记CD14荧光二抗(Biolegend，catalog )，常温孵育1 h，标识巨噬细胞。PBS浸洗，DAPI染核。用加抗淬灭剂的封片剂封片。注意避光操作。 组织芯片仪为购自韩国UNITMA公司的Quick-Ray，组织切片机为德国Leica公司2145型。由高年资病理医生对供体蜡块及相对应的HE切片复片，镜下选取目标区域，用Marker笔在玻