微生物的培养与应用专题.pptVIP

消毒与灭菌的比较 第20页，共70页，编辑于2022年，星期日 ①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒。 ⑴.消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 第21页，共70页，编辑于2022年，星期日 表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯 。照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果。 第22页，共70页，编辑于2022年，星期日 （2）灭菌 a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 第23页，共70页，编辑于2022年，星期日 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 第24页，共70页，编辑于2022年，星期日 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 ⑴培养细菌用的培养基与培养皿 ⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管 ⑶实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌； （3）需要消毒。 P16旁栏思考 第25页，共70页，编辑于2022年，星期日 二.实验操作(以培养大肠杆菌为例) ㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.计算 2.称量 3.溶化 4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 第26页，共70页，编辑于2022年，星期日 倒平板操作 第27页，共70页，编辑于2022年，星期日 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 第28页，共70页，编辑于2022年，星期日 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 第29页，共70页，编辑于2022年，星期日 关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（　　） 　　A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 　　B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸 　　C.待培养基冷却至50℃左右时，进行倒平板 　　D.待平板冷却凝固约5min～10min后，将平板倒过来放置 　　解析：选A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，故A项错误。 第30页，共70页，编辑于2022年，星期日 ㈡.纯化大肠杆菌 平板划线法和稀释涂布平板法。 微生物的接种的常用接种方法有： 1.平板划线的操作方法 视频 第31页，共70页，编辑于2022年，星期日 第32页，共70页，编辑于2022年，星期日 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第33页，共70页，编辑于2022年，星期日 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 第34页，共70页，编辑于2022年，星期日 答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合