调查四川省越西县和昭觉县HIV抗病毒治疗停药患者耐药情况.doc

调查四川省越西县和昭觉县HIV抗病毒治疗停药患者耐药情况 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：调查四川省越西县和昭觉县HIV抗病毒治疗停药患者耐药情况 1 1、对象与方法 2 2、结果 4 3、讨论 6 文2：试议乙肝抗病毒治疗何时能安全停药 7 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 调查四川省越西县和昭觉县HIV抗病毒治疗停药患者耐药情况 文1：调查四川省越西县和昭觉县HIV抗病毒治疗停药患者耐药情况 “90-90-90”即90%的HIV感染者了解自身的感染状况、90%的确证感染者接受抗病毒治疗和90%接受治疗的感染者得到病毒抑制已成为全球范围内防治艾滋病的主要策略之一[1]。抗病毒治疗（antiretroviral therapy，ART）能抑制HIV/AIDS体内病毒的复制[2]，恢复人体免疫系统功能[3-4]，提高感染者的生存质量[5]并降低死亡率[6-7]，同时减少HIV传播的概率[8]。接受抗病毒治疗的患者停药后其体内的HIV病毒复制得不到抑制，病毒载量升高[9-11]，CD4计数水平降低[12]，增加了患者的死亡以及HIV传播的风险。四川省凉山彝族自治州（凉山州）是我国艾滋病疫情最严重的地区之一。现存活HIV感染者/艾滋病病人以及正在接受抗病毒治疗的人数均居四川省首位[13]，治疗覆盖率达%。随着感染人数和治疗覆盖率的上升，停药患者的数量也随之增加。有队列研究显示，凉山州西昌市抗病毒治疗第一年内的脱失率达到/100人年[14]。本研究调查凉山州抗病毒治疗停药患者高危行为、病毒载量和耐药情况，以期为指导该部分人群再次接受有效的抗病毒治疗，为降低HIV毒株特别是耐药毒株的传播提供数据支持。 1、对象与方法 对象资料 在四川省已开展抗病毒治疗地区，选择重点人群/扩大治疗地区使用主要抗病毒治疗方案人数最多的凉山州。以县或市内治疗点为基本抽样单位，选择该州抗病毒治疗方案人数多的越西县和昭觉县两个治疗点，对其2018年HIV抗病毒治疗停药患者按照抗病毒治疗号顺序进行横断面调查。纳入标准为：（1）年龄≥18周岁；（2)HIV确证阳性并接受过抗病毒治疗；（3）连续停药1个月及以上并存活；（4）自愿参加调查并签署知情同意书。 NucliseEasyQ Analyzer核酸测定仪（法国）；全自动核酸提取仪（Qiagen，德国）；9700 PCR仪（Thermo Fishecien-tific，美国）；NucliseEasyQHIV-1定量检测试剂盒（Biomerieux，法国）；QIAsymphony全自动RNA提取试剂盒（Qiagen，德国）；RT-PCR一步法扩增试剂盒（Promega，美国）；2×Taq PCR MasterMix（北京天根生化科技有限公司，中国） 方法 本研究由县疾病预防控制中心及医院工作人员作为调查员，经统一培训后对调查对象进行面对面问卷调查。主要包括年龄、性别、民族、文化程度、婚姻状况、职业和感染途径等社会人口学信息，抗病毒治疗时间、治疗前CD4水平、治疗方案、停药时间和停药原因等抗病毒治疗相关信息，及性病感染状况、安全套使用频率以及毒品和成瘾物质滥用等高危行为信息。 HIV-1定量检测 收集停药患者的静脉血，分离血浆[12，15]。采用NucliseEasyQ Analyzer核酸测定仪和NucliseEasyQHIV-1定量检测试剂盒，血浆HIV-1病毒载量检测按试剂说明书进行。 HIV的pol基因区片段扩增 使用QIAsymphony全自动核酸提取仪和全自动RNA提取试剂盒，按照仪器和试剂盒使用说明书，提取血浆样本中的HIV-1 RNA。通过一步法反转录聚合酶链反应（Revee Tracription PCR，RT-PCR）扩增HIV的pol基因区片段，扩增长度为，包括蛋白酶区1～99个密码子和逆转录酶区1～250个密码子，详细过程及扩增引物参照已发表文献[13，16] -1亚型和耐药的判定 目标产物送至北京诺赛基因组研究中心有限公司测序。使用Sequencher ，使用BioEdit 。下载Los Alamos HIV序列数据库中的HIV-1亚型参考序列，与该研究的目标序列一起通过MEGA 构建Neighbor-Joining系统进化树，Bootstrap检验次数为1000次。与参考毒株序列成簇，并且Bootstrap校验值≥即判定为与参考毒株同一亚型。将序列提交至斯坦福耐药数据库（Stanford HIV Drug Resistance Database，http:），通过在线分析工具进行耐药分析，下载所有抗病毒治疗药物的耐药评分以及耐药突变位点情况。定义所有