WB01酶联免疫法快速检测牛乳中三聚氰胺操作说明概要.docVIP

WB01酶联免疫法迅速检测牛乳中三聚氰胺操作说明纲领 WB01酶联免疫法迅速检测牛乳中三聚氰胺操作说明纲领 WB01酶联免疫法迅速检测牛乳中三聚氰胺操作说明纲领 农产品与食质量量检测技术教课资源库 酶联免疫法迅速检测牛乳中的三聚氰胺操作说明 1样品前办理 ①取  1mL成品纯牛奶样本，加  1mL去离子水，涡动  1min  混匀； ②拿出  40μL样本溶液，用  960μL样本稀释液稀释，涡动  1min  混匀； ③取  50μL用于分析。 2检测步骤 ①将所需试剂从冷藏环境中拿出，置于室温（20℃-25℃）均衡30min以上，清洗工作 液在使用前也需回至室温。 ②拿出需要数目的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保留于 2℃-8℃，切勿冷冻。 ③加标准品/样本：加标准品或样本 50μL/孔到对应的微孔中（每个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的地点），再加入酶标物 50μL/孔，再加入抗试剂 50 μL/孔，轻轻振荡均匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反响30min。 ④洗板：当心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加入清洗液 250μL/孔，充分清洗4次， 每次间隔10s，用吸水纸拍干。 ⑤显色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖 板膜盖板后置室温25℃避光环境反响15～20min。 ⑥测定：加入停止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处测定每孔吸光 度值。 结果判读①定性分析 用样本的均匀吸光度值与标准值比较即可得出浓度范围（ppb）。②定量分析 百分吸光率的计算：百分吸光度值（%）=×100% 此中B为标准溶液或供试样品的均匀吸光度值；B0为零标准溶液均匀吸光度值；三聚氰 胺标准溶液浓度为0ng/mL、1ng/mL、3ng/mL、9ng/mL、27ng/mL、81ng/mL。 标准曲线的绘制与计算：以标准品百分吸光率为纵坐标，以三聚氰胺标准品浓度（ng/mL ppb））的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率带入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释系数即为样本中三聚氰胺实质残留量。 4注意事项 农产品与食质量量检测技术教课资源库 试剂盒保留2℃-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋从头密封。标准品和显色 剂对光敏感，避光保留。 显色剂有任何颜色表面显色剂变质。0标准的吸光度值小于 试剂及样本没有回到室温会以致全部标准的OD值偏低。  0.5时，表示试剂变质。 该试剂盒最正确反响温度为25℃，温度过高或过低将以致检测吸光度值和敏捷度发生变 化。 不要使用过了有效期的试剂盒；不要交织使用不一样批号试剂盒中的试剂。 浓缩清洗液低温下若有结晶属正常现象，请37℃水浴溶解后使用。 每加一种试剂前需将其摇匀。 洗板拍干后应马上进行下一步操作。如板孔干燥，则会出现标准曲线线性不好，重复性差的现象。 停止液为2M硫酸，防范接触皮肤和衣物。 检测时一般会接触到有毒物质，需戴手套操作。 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15min-20min即可。若颜色较浅，可延伸反响时间到30min（或更长）。反之，则减短反响时间。