标本采集分离培养和鉴定.pdfVIP

附件2 标本采集、分离培养和鉴定 1. 标本采集 标本采集应在2 小时内用无菌方法采集新鲜标本，置于灭菌容器中或直接接 种于增菌培养基中，登记好标本编号和来源送检，如不能及时送检，标本要存放 在专用的标本运送箱内，包扎好以免容器破损。 1. 1 血液 应根据病程的不同阶段采集不同标本进行检测，宜在发病早期和抗生素使用 前采集。抽取病人 3～5ml 血液，立即接种已在室温（20℃）平衡的血培养瓶 中。推荐采血量为 10ml。所有情况下，接种的标本量必须做好记录。血培养瓶 在室温条件下运送至实验室。 1. 2 血清 余下的2ml 病人血液 （作为上述采集血液程序的一部分）及病后2-3 周采集 恢复期血液2ml，分离血清做血清学检测（肥达氏试验等）。 1. 3 粪便 用无菌采便器采集新排出的粪便约1g 直接放入增菌培养管（8-10ml 沙门菌 增菌液）内，尽快送检。 1. 4 水样标本 按《伤寒、副伤寒防治手册》中所述的方法进行水源标本的采 集和分离培养。 1. 5 食品标本 固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操 作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《中华人民共和 国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）》。 注意事项 采集标本及标本接收时应认真核对名单及标本号，并作好收样记 录（附表2 ）。 2. 分离培 2. 1 血培 血培养瓶放在37℃培养箱里培 10 天，每天观察生长情况，如出 现混浊现象，应马上转种麦康凯/血平板，即使没有肉眼可见的生长，也必须在1、 2、7 天转种麦康凯/血平板。 2. 2 粪便培 增菌管37℃培 18～24 小时 ，挑取培养物转种到SS 平板，37℃ 培 18～24 小时，如果没有观察到有可疑菌落生长，再继续培 24 小时，观察 结果，挑取可疑菌落。 2. 3 水样标本 按《伤寒、副伤寒防治手册》中所述的方法进行水源标本的采 集和分离培养。 2. 4 食品标本 固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操 作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《中华人民共和 国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）》。 2. 5 菌落形态 见表1。 表1 沙门菌属菌落形态 沙门菌属 大肠杆菌 麦康凯平板 不发酵乳糖（无色）的光滑型菌落 发酵乳糖（粉色）的光滑型菌落 SS 平板 不发酵乳糖、产 H S （中心黑色的无 发酵乳糖（粉色）菌落 2 色菌落）或不产H S 2 3. 生化鉴定 从每个标本的血培养瓶转种的麦康凯平板挑取3 个可疑菌落，粪便培养转种 的麦康 /SS 平板挑取3-5 个可疑菌落分别转种到以下培养基： 3. 1 KIA ：穿刺2/3 中段，在斜面上划线。 37℃培养18～24h，观察生化试验结果，挑取KIA 生化管上菌苔做革兰 氏染色，并做好记录。 3. 2 符合沙门菌KIA 反应的，取该管斜面菌苔转种 MIU ：穿刺接种培养基，并沿穿刺线拔出接种针。 西檬氏枸橼酸盐琼脂：在斜面上划线。 *生化结果及血清凝集试验符合菌株转种一个营养琼脂平板（药敏实验用）。 伤寒副伤寒沙门菌生化特性如表2，表3 。 表2 伤寒、副伤寒沙门菌生化特性 KIA MIU 菌 乳 葡萄 斜面 颜 中段 尿 动 靛基 H S 颜色变化 糖 糖 2 色 颜色 素 力 质