食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验 全国食品卫生标准委员会 微生物标准协作组 2008.11 一种重要的食源性致病菌 主要与海产品消费有关 我国沿海地区细菌性食源性疾病暴发最主要的致病因子 国外海产品副溶菌限量 美国FDA规定软体贝类总体副溶菌密度104 MPN/g； 日本规定生食贝类与鱼片总体副溶菌密度100 CFU/g 副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus） 国外检验方法 美国FDA方法－BAM 网络版 第9章 弧菌 2004 第8版 1995/1998 加拿大 MFHPB-15 海产品和贝类副溶血性弧菌的检验, 1997 MFLP-57 海产品和贝类副溶血性弧菌的计数, 1996 日本 食品卫生检查指针微生物编, 2004 ISO标准 8914:1990（E）微生物学：副溶血性弧菌检验的总体指南 NMKL 食品中致病菌的检测和计数, 1997 CCFRA 副溶血性弧菌检验 17.1:1995 以科学技术和实践经验为依据，经科学研究制定 与国际方法接轨 修订法同时体现定性、定量分析流程 标准的修订原则 实验室内研究 MPN计数与涂布平板计数的对比 食品类别 加标菌株 稀释倍数 MPN法（MPN/g） 涂布平板计数（CFU/g） 猪肉馅 05VP337 10-6 2.4 1.4 05VP337 10-7 0.43 — 冻虾仁 05VP337 10-6 0.93 0.6 05VP337 10-7 0.04 — 海鱼 ATCC17802 10-6 0.04 — ATCC17802 10-7 0.03 — 培养基上可疑菌落的准确性 食品 类别 国标法 可疑菌落数 阳性数 准确率（%） 修订法 可疑菌落数 阳性数 准确率（%） 猪肉馅 选择性平板 30 30 100 科玛嘉 40 40 100 蔗糖平板 30 30 100 TCBS 40 40 100 冻虾仁 选择性平板 63 42 78 科玛嘉 25 25 100 蔗糖平板 57 35 61 TCBS 74 74 100 海鱼 选择性平板 30 28 93 科玛嘉 74 74 100 蔗糖平板 30 25 83 TCBS 51 51 100 牡蛎 选择性平板 27 6 22 科玛嘉 28 26 93 蔗糖平板 18 5 28 TCBS 19 19 100 染菌试验的实验室内研究 食品类别 加样浓度等级 MPN/g 试样数 阳性数 国标法 修订法 猪肉馅 高 2.4 10 10 10 低 0.43 10 10 10 对照 0.03 10 0 0 冻虾仁 高 0.93 10 10 10 低 0.04 9 5 9 对照 0.03 10 0 0 海鱼 低 0.04 10 9 10 极低 0.04 10 1 4 对照 0.03 10 0 0 牡蛎 对照 0.23 11 3 6 染菌试验的合作研究 食品类别 加样浓度等级 MPN/g 试样数 阳性数 国标法 修订法 牛肉馅 天然污染 0.03 24 7 6 低 0.03 24 1 3 阴性对照 0.03 24 0 0 冻鳕鱼 第一批 2.1 24 5 21 第二批 0.03 24 0 5 第三批 0.03 24 0 1 牡蛎肉 第一批 2.9 24 20 23 第二批 0.24 21 12 18 第三批 0.03 24 2 6 合作比对研究 样品制备 增菌（定性/定量） 分离 纯培养 初步鉴定 确定鉴定 报告 检验方法文本要点 8~18h FDA:16~18h 增菌时间 TCBS平板 科玛嘉弧菌显色平板 圆的、半透明的、表面光滑的粉紫色菌落，直径2 mm～3 mm 圆的、半透明的、表面光滑的绿色菌落，有粘性，直径2 mm～3 mm TSA 3个或以上 纯培养 使用MPN表 示例 10 g 1 g 0.1 g 0.01 g 0.001 g A 3 1 0 0 0 310×× 首先，如果最高稀释度及其相邻较低稀释度的全部管均为阴性，剔除最高稀释度。只要这种情形存在，并且余下4个稀释度，继续剔除这些稀释度。 其次，如果只余下3个稀释度，采用这3个稀释度，如A所示。 使用MPN表 示例 10 g 1 g 0.1 g 0.01 g 0.001 g B 3 3 1 0 0 ×310× C 2 3 2 3 1 ×× 231 如果还剩下3个以上的稀释度，那么找到全部管均为阳性的最高稀释度。此处存在3种情形。 第1种情形，全部