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实验室日常小技巧集锦 平时在实验室最常听到的一句话就是“今天某某试验没做好是为什么？今天某某试验没出结 果是什么原因？今天某某试验为什么会是这样的呢？” 等等。然后仔细一查找原因，往往是 由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到。以下是集各路朋友的一些经验， 与大家分享：  1 跑 page 胶的时候，小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会 比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。  2. 提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因 素。所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是 37 度温箱放长一点的时间， 我试过室温过夜，酶切很好。  3. 做 WESTERN BLOT 的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间 等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大 量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将 PVDF 膜晾干，裁减成小块，保存起 来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说，节约了大量的时间。  4. 有关缓冲液和培养基配置  1）将缓冲液配方中的成分分别以 10－100 倍配成母液储存，需要的时候只需将相应的母液 混合，补加水稀释即可  2）配培养基时通常会忘记各成分的量，如配 LB 时的三个成分不记得到底哪个是 5g，哪个 要 10 个，因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量，如配 LB 时，在NaCl 瓶外注明  10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前临时翻书  5. 有关 PCR主反应液配置:  在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行 PCR 鉴定，每次配置 PCR 反应液很繁琐， 可以将其配置类似 kit 的形式，按你需要的反应体系列表，然后放大 100 倍配置 100×主反应 液（100 次反应），其中含 buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和 Taq 酶，然后可以 10×分 装或一管储存在－20度，在需要的时候拿出融开，然后按所需的 PCR 反应个数吸取相应的 倍数，再补加相应反应倍数的 Taq 和引物，混匀后分装，这样做的好处如下：  1）可极大的节省宝贵的时间，可早点收工，看球  2）避免每次反应加样不均的可能  3）大大减少 PCR 假阳性的产生  6. 有关酶切反应液的配置:  在做酶切时，也可以象 PCR 一样配置主反应液，每次反应前先列好反应的体系，算好需要 的反应数，然后按所需反应的体系按所需反应数放大，加入 buffer、酶、水，质粒栏空缺， 然后混合后按除质粒 DNA 的体积分装，然后再在每管中加入相应体积的质粒 DNA 酶切， 这样做的好处如下，特别是当同时有 10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显： 1）各反应成分均一  2）可大大减少限制型内切酶的使用  3）节省时间  7. 有关 SDS－PAGE：  1）可将 SDS－PAGE 的积层胶，分离胶预先配好大体积如 100ml 储存在 4 度冰箱（注：10％  AP，TEMED 不加，切记！！！），每次配置时只需吸取相应体积的预制胶加入 AP，TEMED  即可，没必要每次制胶时候翻分子克隆，特别方便，而且，这样的预制胶可储存半年以上， 不失为偷懒的绝佳方法；更关键的是可大大减少与丙稀酰胺的接触，因此大大减少中毒的机 会。  2）电泳时虽然小电泳分离效果要好一些，但 2 小时以上的等待的时间实在是痛苦，因此可 以提高电泳至 150V，但需要将整个电泳槽放在放满冰水的脸盆里散热，这样跑出来的胶分 离效果丝毫不比低电压来的差，关键是时间大大节省，不需 1h 即可看结果了  8. 实验中小窍门我想能够分成两类：一类是“非常规”操作；一类是常规操作过程中一些省 时省事手段。 前一类，我举个例子：有时候第一天涂的转化平板、次日早晨转化子可能长成的菌落比较大 （1~2 毫米以上，BL21 就长得快），下一步转化子做质粒鉴定。这个情况下可以直接挑取一 块菌苔（勿带出培养基），50 微升酚/氯仿悬浮菌体，放置两分钟，加 40 微升 TE 抽提，上 层 TE 吸出后再氯仿抽提一次，吸取上层 TE 即是质粒提取液。提取的质粒可以直接用于电 泳和酶切。这样操作，可以省去转接液体试管的培养步骤，至少节省 6~8 小时的时间。但是， 要在各步骤都控制得很好的情况下才能保证提取和酶切的效果，不同的实验室或者操作者未 必能够很方便地重复 其实，其它的一 “小窍门”也是如此。 后一类的小窍门则在实验室