实验八SDSPAGE测定蛋白质分子量.pptxVIP

会计学; 实验目的;一. PAGE分离蛋白质的原理;聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacryamide gel electrophoresis);聚丙烯酰胺凝胶的合成;;凝胶浓度的计算; 聚丙烯酰胺的聚合及影响因素;②光聚合：以核黄素为催化剂在少量的氧存在下,分解成无色的还原型，在少量的O2条件下，还原型的核黄素氧化成有游离基的黄素环，聚合反应发生。 用量少，不会对样品有任何不良的干扰现象；故常用于样品胶的聚合； 聚合的时间可以自由控制 缺点：光照的量不容易掌握，重现性不太好； 光聚合适合大孔径凝胶的聚合，化学聚???适合各种凝胶的聚合。 ; 聚丙烯酰胺凝胶的孔径和分子筛效应;;; 不连续凝胶电泳（disc）的分离原理;①.浓缩效应;②分子筛效应;③电荷效应;操作;缓冲液系统;标准蛋白质样品;;; 实验原理;实验原理; 实验原理; 实验试剂和器材;2.实验试剂;（7）10%过硫酸铵(AP)（8）TEMED（四甲基乙二胺）（9）样品溶解液：SDS（100mg）+巯基乙醇（0.1ml）+ 溴酚蓝（2mg）+甘油（2g） +0.05mol/L pH8.3Tris- HCl（2ml），最后定容至10ml。（10）固定液：取50%甲醇454ml，冰乙酸46ml混匀。（11）染色液：称取考马斯亮蓝R250 0.125g，加上述固定液  250ml， 过滤后备用。（12）脱色液：冰乙酸75ml，甲醇50ml，加蒸馏水定容至1000ml。（13）电极缓冲液（内含0.1%SDS，0.05mol/LTris- 0.384mol/L甘氨酸缓冲液pH8.3）：称Tris6.0g，甘 氨酸28.8g，加入SDS1g，加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml。;3. 实验器材;各部分凝胶配制—参看实验指导 P57; 操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;分析计算;思考题;注意事项;注意事项;注意事项