离子交换色谱展示.ppt

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关于离子交换色谱展示 第1页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 基本原理: 离子交换色谱 (ion exchange chromatography,IEC) 以离子交换树脂作为固定相,树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。 第2页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 主要用于分离离子或可离解的化合物,包括氨基酸,多肽,核酸,核苷等各种生物大分子。 离子交换色谱的运用: 第3页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 分离纯化生物大分子 Po+ZDo=Pb+ZDb 重视 Po:流动相中溶质的浓度; Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; Do:流动相中洗脱剂的浓度; Db:填料表面上洗脱剂的浓度; Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 被置换的洗脱剂的数目; 第4页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 以离子交换色谱快速纯化 8 一 淀粉酶为例 研究探讨离子交换色谱 第5页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%,比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀粉酶提供了一个新工艺路线。 高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反应的平衡常数。 1.0 摘要: 第6页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 2.0实验部分  2.1标准酶液配制 用微量天平准确称取5mg高纯度的 a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心机上离心5min,小心转移上部清液于另一离心试管中,此液相当于1062u/ml活力. 第7页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第8页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第9页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第10页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 3.0结果与讨论 3.1 洗脱剂 为获得高的洗脱效率,本实验选用0.02mol/L Tris-2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱剂.(Tris-指三羟甲基氨基甲烷 ) 第11页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第12页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第13页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回收率提高。洗脱液中离子强度对洗脱效率的影 响可归结为离子交换平衡的移动,这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性 ,符合离子交换色谱的洗脱规律。但在2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 能力下降。这种反常现象,可能是由于离子交换柱的多功能特性引起。 第14页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附 的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。 所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L. 第15页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 3.3 PH对活性回收率的影响 第16页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第17页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第18页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 第19页,共21页,2022年,5月20日,14点46分,星期五 * * * * * * * * * * * * *

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