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绿僵菌侵染对黏虫免疫反应的影响 　　摘要为揭示黏虫被病原菌侵染后的免疫应答机制，本试验分析比较了黏虫幼虫被金龟子绿僵菌metarhiziumanisopliae侵染后不同时间其血淋巴蛋白含量、免疫关键酶系（酚氧化酶po，溶菌酶）活性、抗菌活力以及血细胞数量等免疫相关指标的变化。结果表明：受绿僵菌侵染后，黏虫6龄幼虫血淋巴蛋白含量在侵染初期（6h和24h）显著高于对照，侵染48、72和96h后幼虫血淋巴蛋白质含量显著低于对照。且侵染后幼虫血淋巴po活性也呈现先升高后降低的趋势，侵染初期（6h和24h）显著高于对照，侵染后期除72h外与对照组无显著差异。侵染初期（24h）溶茵酶活性也显著升高，随后出现下降，并于48h显著低于对照，但在化蛹时（96h）再次上升。绿僵菌侵染后期，黏虫的抗菌活性下降，于侵染后72h抗菌活性显著低于对照，而侵染初期抗菌活性与对照无显著差异。另外，绿僵茵侵染对幼虫血细胞数量以及浆血胞比率也有显著的影响，表现为：侵染后6h和24h血细胞总数、浆血胞比率均显著高于对照，随后与对照并无显著差异。综上，绿僵茵侵染黏虫幼虫初期会显著诱导其免疫反应的启动，体现在主要免疫指标升高，而后随着免疫系统的破坏与能量的消耗，其免疫反应能力降低，生理活动受到干扰。 　　关键词黏虫;金龟子绿僵菌;免疫反应 　　中图分类号：s476.12文献标识码：adoi：10.16688/j.zwbh.2017132 　　昆虫在繁衍过程中会因为种种原因受到外界天敌寄生或病原物侵染，其正常的生长发育受到严重影响。而昆虫能在各种不同的外界环境中生存，与其自身的免疫反应有重要的关系。昆虫作为无脊椎动物，免疫系统以先天性免疫为主。与高等动物相比，昆虫体内缺乏更高等级的免疫球蛋白等免疫物质，但在长期的进化过程中发展出一套独特的防御系统来阻止外来生物的侵入。除坚硬的表皮、组织外，昆虫血淋巴系统在免疫机制中也承担着重要的作用，其中主要包括体液免疫和细胞免疫两大系统。当昆虫受到外源病原物的刺激时，酚氧化酶（phenoloxidase，po）可以参与昆虫表皮的硬化和黑化，从而支撑和保护虫体正常的生长发育;而当病原物进入虫体后，溶菌酶可以导致病原体细胞壁破裂并使内容物逸出，最终病原细胞破裂死亡;抗菌肽是昆虫被病原菌感染后，虫体内快速产生的一种免疫诱导分子，对外源病原物具有强有力的杀伤作用;血淋巴细胞是昆虫细胞免疫的主要执行者，血细胞的种类和数量是细胞免疫反应的重要指标，免疫血细胞可对外源异物进行吞噬、形成结节、包被和血凝等，从而参与伤口的愈合、凝结、合成及分泌免疫相关因子。因此，po活性、溶菌酶活性、抗菌活力和免疫血细胞数量等免疫指标的变化是昆虫免疫反应的标志性参数。这些免疫反应同时也会影响昆虫的资源分配并可能改变其行为或发育方向，从而影响种群动态。 　　黏虫mythimnaseparata（walker）是一种典型的季节性远距离迁飞害虫，是严重威胁我国主要粮食作物生产安全的重大害虫。黏虫发生范围广，为害世代多，除2012年和2013年连续在全国大发生外，近年来，在我国局部地区同样暴发成灾。而在全国开展的黏虫为害调查显示，幼虫表皮发生黑化可作为成灾种群典型的预警信息。黑化幼虫抵抗天敌和病原物入侵的能力明显增强，一些常用的生物制剂对其防治效果不明显。研究发现，黏虫幼虫黑化是一种典型的密度依赖型现象，黑化幼虫适应能力的增强主要体现在取食量大、抗逆能力增加和由其发育而来的成虫迁飞能力提高等方面，从而导致生产上为害更加严重。近年研究也发现高密度饲养的幼虫表皮黑化程度明显高于单头饲养的黏虫，较高密度饲养的黏虫（10头/瓶）抵抗伞裙追寄蝇exoristacivilisrondani的寄生和绿僵菌侵染的能力明显增加，其6龄幼虫表皮和血淋巴酚氧化酶（po）的活性也显著高于单头饲养的黏虫，这些结果初步明确了po活性的增加是高密度幼虫黑化及抗病能力提高的关键因素。然而，目前对黑化黏虫的研究多集中在生长发育和行为变化方面，关于黑化黏虫防御的免疫应答机制方面还未有报道。因此，本研究旨在通过绿僵菌侵染黑化黏虫6龄幼虫后测定其血淋巴蛋白质含量、po活性、溶菌酶活性、抗菌物质和血细胞数量等免疫指标的变化，揭示黑化黏虫的相关免疫反应，从而对指导和发展其生物防治提供重要数据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　供试菌株：金龟子绿僵菌metarhiziumaniso-pliae（metch.）sor购自神威生物公司。 　　供试昆虫及饲养：在吉林采集的高龄黏虫，在实验室繁殖6代。在饲养密度为10头/瓶（直径9cm×高13cm）条件下诱导出的黑化型黏虫。幼虫饲养参照吕伟祥等室内人工饲养方法，培养温度为（23-1-1）℃，光周期为l