酶标仪工作原理及使用方法.docxVIP

酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动 2 酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动 2 大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计, 即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的最终体积在 250μL以下，用一般光电比色 计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。 酶标仪原理： 酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和 光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标 本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱 不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X 方向和Y 方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程. 而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了 X,Y 方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单. 酶标仪简介： 微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小 微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小 孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液 孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液. 光是电磁波，波长 光是电磁波，波长100nm~400nm 称为紫外光，400nm~780nm 之间的光可被人眼观察到， 大于 大于 780nm 称为红外光。人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回 来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收， 来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收， 反射出来，所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 反射出来，所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光 随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光 度 度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。 酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长 酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长 范围内的任意波长，而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。 范围内的任意波长，而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。 检测单位 检测单位 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被 检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 密度， OD=log(1/trans) 密度， OD=log(1/trans)，其中trans 为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer 法则， 检测单位用OD 值表示， OD 是optical density(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光 OD OD 值与光强度成下述关系: E=OD=log(lo/Ι E=OD=log(lo/Ι) 其中 E 表示被吸收的光密度， Ιo 为在检测物之前的光强度，Ι 为从被检测 物出来的光强度。 物出来的光强度。 OD OD 值由下述公式计算: c c 为检测物的浓度 b 为检测物的厚度 a 为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能 量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选 量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选 择特定的波长进行检测，称为测量波长。 择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再 选取一个参