土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4067.pdf

土壤亮氨酸氨基肽酶 （S-LAP）活性检测试剂盒说明书 微量法 注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。 货号：UPLC-MS-4067 规格：100T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。 试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体 30mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×2 瓶 2-8℃保存 溶液的配制： 1、 试剂二：临用前取 1瓶加入 1.875mL 丙酮溶解，用不完的试剂 2-8℃保存一周。 产品说明： S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切 相关。 S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计 算S-LAP活性。 S-LAP L-Leucine-p-Nitroanilide P-Nitrophenol 注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、离心机、水浴锅、研钵、甲苯 （不允许快递）、丙 酮 （不允许快递）、30-50目筛、蒸馏水。 操作步骤： 一、样本处理 （可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 取 新鲜土样自然风干或 37℃烘干，过 30-50 目筛。 二、测定步骤 1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、 加样表： 测定管 对照管 风干土样 （g） 0.03 0.03 甲苯 （μL） 15 15 震荡混匀，室温静置15min。 试剂一 （μL） 255 255 电话：400-998-2324 邮箱：service_uplc_ms@163.com 网址： 本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司 第 1 页 共 2 页 试剂二 （μL） 30 - 置于30℃水浴锅准确反应1h后，立刻煮沸5min （盖紧，缠封口膜，防止崩开水分散失）。流水冷却至室温。 试剂二 （μL） - 30 14000g，常温离心10min，取200μL上清于405nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算 ΔA A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。 三、酶活计算公式 A 按微量比色皿计算： 酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。 9 S-LAP 活性 （U/g 土样） ΔA÷(ε×d) ×10 ×V反总÷W÷T 0.507×