[液相色谱]HPLC的常见问题及解答.pdfVIP

关于 HPLC 的常见问题及解答 一、问:用 HPLC 进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 答:关于漂移问题： 1 ．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2 ．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3 ．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 1 ．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2 ．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3 ．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 二、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？/B 答: 1 ．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2 ．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 三、问：HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法/B 答: 1 ．样品量不足，解决办法为增加样品量 2 ．样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3 ．样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4 ．检测器衰减太多。调整衰减即可。 5 ．检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 6 ．检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7 ．检测池中有气泡。解决办法为排气。 8 ．记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 9 ．流动相流量不合适。调整流速即可。 10 ．检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 四、问：做 HPLC 分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？/B 1 读万卷书 行万里路 答：原因可能有： 1 ．泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； 2 ．比例阀失效，更换比例阀即可； 3 ．泵密封垫损坏，更换密封垫即可； 4 ．溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； 5 ．系统检漏，找出漏点，密封即可； 6 ．梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 五、问：我购买的 HPLC 柱验收测试时柱压过高，请问为什么？/B 答：柱压过高是 HPLC 柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题， 您可按下面步骤检查问题的起因。 1 ．拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高 ，再检查； 2 ．把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3 ．将柱子的进出口反过来接在仪器上，用 10 倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器， 以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4 ．更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵 塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。 一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过 滤器便可避免柱压过高的问题，SGE 提供的 Rheodyne 7315 型过滤器就是解决这一问题的最佳选 择。 2 读万卷书 行万里路