FISH技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究幻灯.pptxVIP

会计学1FISH技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究幻灯 2宫颈癌对中国妇女的高危害度中国妇女患宫颈癌比例15/10万，是仅次于智利的宫颈癌高发国家我国目前宫颈癌患者约40万人，每年新增患者?15万，居女性生殖道肿瘤首位 我国宫颈癌死亡率为11.34%，居女性癌症死亡率第二位，特别在西部地区，宫颈癌居女性癌症死亡率之首近年来性传播疾病使其迅速增加(性传播疾病)第1页/共42页 3我国宫颈癌治疗现状缺乏早期干预、阻止发展的有效手段仍是以手术和放疗为主不同期别的宫颈癌还没有确立一个规范化的治疗标准第2页/共42页 4看看这些英年早逝的艺人，她们死于宫颈癌……第3页/共42页 5卫生部2007年课题（WKJ2007-3-001）第4页/共42页 6★课题负责人：北京大学魏丽惠教授★课题参加单位：全国36家医院★郑州大学第一附属医院首批参加的医院之一，负责人为乔玉环教授第5页/共42页 7★宫颈癌仍居女性生殖道恶性肿瘤之首★致病元凶是高危型人乳头瘤病毒（HPV） ★从感染高危型HPV至宫颈癌的发生通常需要一个相对较长的时间研究背景第6页/共42页 8持续性HPV感染细胞分化失调控宫颈上皮内瘤变CIN CIN1 CIN2 CIN3宫颈癌 Normal宫颈癌筛查和预防的前提和基础 第7页/共42页 965%自行消退20%持续存在15%进展CINⅠ的转归？？第8页/共42页 101宫颈癌前病变和早期宫颈癌的有效筛查2寻找能预测CIN“逆转”或持续进展为宫颈癌的可靠指标本领域的研究热点 第9页/共42页 11宫颈病变筛查技术 –最佳方案液基细胞学检查（TCT）宫颈病变筛查方案 高危型HPV-DNA检测第10页/共42页 12TCT敏感性低（ 55%-75%）重复性差 HPV敏感度高阳性预测值低，大多HPV阳性患者自然转阴 宫颈病变筛查技术的不足需要寻找新的有效检测指标或手段 第11页/共42页 13人类染色体末端酶（hTERC）基因1995年由Feng等首次从肾癌293细胞系cDNA文库中筛选出，定位于3q26.3hTERC基因扩增可使细胞永生化，导致肿瘤产生宫颈细胞由非典型性增生向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂（3q）的扩增对宫颈癌染色体不稳定的研究也显示，常见染色体3q的增加，其中，涉及到的最重要的基因hTERC基因 第12页/共42页 14hTERC基因扩增是宫颈癌变过程中的早期事件学者Heselmeyer等首次检测宫颈细胞涂片中的hTERC基因，发现hTERC基因扩增随细胞学病变的严重程度而增加，可作为预测宫颈高度病变的独立指标。我们研究组的初步研究结果表明，hTERC的扩增率与宫颈病变严重程度密切相关，在宫颈癌筛查中，可弥补TCT和HC2检测HPV DNA的不足 。cc.ppt第13页/共42页 15资料与方法第14页/共42页 16研究对象 年龄18～56岁，平均年龄37.4±7.3岁 第15页/共42页 17研究方法 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）GLP TERC/CSP3 探针由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供，按探针试剂盒说明进行操作 第16页/共42页 18结果分析hTERC探针：GLP探针，标记红色荧光对照探针：CSP3探针，标记绿色荧光正常细胞判断：单个间期细胞红色及绿色信号各2个异常细胞判断：红色信号大于2个，且绿色信号不少于2个为hTERC基因扩增异常细胞 第17页/共42页 19结果判定阈值建立：采集20例正常宫颈细胞，使用上述方法进行FISH实验，每例至少分析100个细胞，统计出现hTERC基因异常扩增细胞数目的百分比。 阈值= 平均数（M）+ 3×标准差（SD）本研究阈值为7.1% 阳性结果判定每例样本随机计数100个细胞，计算其中hTERC基因异常扩增细胞的百分比，如果百分比大于阈值，判定为阳性结果；如果小于阈值，判定为阴性结果；如果等于阈值，加大观测样本细胞数目。第18页/共42页 20统计方法 采用SPSS13.0统计软件包，各组计数资料结果采用χ2检验及Fisher确切概率法。检验水准α=0.05 。第19页/共42页 21结 果第20页/共42页 22一、各组宫颈病变中hTERC基因扩增阳性率比较第21页/共42页 23病变病理例数(n)hTERC基因扩增结果统计量值及P值阳性数阳性百分比慢性宫颈炎33618.19%χ2=41.415P=0.000CIN114214.29%CIN217635.29%CIN3392871.79%宫颈癌171694.12%表1 各组宫颈病变患者宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增阳性率比较第22页/共42页 24 二、TCT和检测hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的比较