生物工程设备及操作技术-08 细胞破碎与分离设备.pptVIP

8.细胞破碎与分离设备 学习目标 知识目标 了解细胞破碎方法的应用现状，各主要细胞破碎设备的特点；熟悉非机械法细胞破碎的作用机理及适应性，各主要细胞破碎设备的结构；掌握机械法细胞破碎的作用机理及适应性，各主要细胞破碎设备的工作过程。 能力目标 掌握珠磨机正确使用维护的要点；掌握高压匀浆器正确使用维护的要点。 随着基因工程和技术的发展与应用，越来越多的具有重大价值的生物工程产品被应用到生活中来。有些生物产品不在发酵液内，而存在于生物物质的细胞内部，特别是大多数用基因重组技术得到的工程菌发酵。要提取这些目的产物时，须先破碎细胞，使产物得以释放，才能进一步提取。 因此，细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤。 8.细胞破碎与分离设备 细胞破碎，是为破坏细胞外围使细胞内含物释放出来。微生物细胞外围，通常包括细胞壁和细胞膜。细胞膜使细胞内外保持一定的浓度差。它主要由蛋白质和脂质组成，强度较差，易受渗透压冲击而破碎。 因此，细胞破碎主要阻力来自细胞壁。为高效破碎细胞，需了解细胞组成与结构及各种细胞破碎方法和常用细胞破碎设备。 8.细胞破碎与分离设备 8.1 细胞破碎原理 一、细菌细胞壁 细菌细胞壁坚韧略具弹性，包围在细胞周围，使细胞具有一定外形和强度，占细胞干重10~25%。 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁的化学组成和结构不同。革兰氏阳性细菌的细胞壁较厚，为20~80nm，只有一层，由肽聚糖组成(40~90%)，其余是多糖和胞壁酸。肽聚糖是大分子聚合体，由若干个N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸及少数氨基酸短肽链组成的亚单位聚合而成。短肽连接在N-乙酰胞壁酸残基上，相邻短肽又交叉相连，形成机械强度很大的多层网状结构，其中75%肽聚糖亚单位又相互交联，网格致密坚固。 革兰氏阴性细菌的细胞壁组成和结构，比革兰氏阳性细菌更复杂。其结构层次明显，分内壁层和外壁层。内壁层较薄，为2~3nm，由肽聚糖组成；外壁层较厚，为8~10nm，由脂蛋白和脂多糖组成。 革兰氏阴性菌细胞壁的肽聚糖结构与革兰氏阳性细菌相同，只是单层网状结构，它们只有30%的肽聚糖亚单位彼此交联，故其网状结构不及革兰氏阳性细菌的坚固，显得较疏松。 8.1 细胞破碎原理 二、酵母菌细胞壁 酵母菌细胞壁厚约1.2μm，不及革兰氏阳性细菌细胞壁坚韧。幼龄酵母菌的细胞壁较薄，有弹性，以后逐渐变厚、变硬。可能仅有部分厚度对细胞壁刚性和强度起重要作用。 酵母细胞壁由特殊的酵母纤维素构成，主要成分是葡聚糖(30~34%)、甘露聚糖(30%)、蛋白质(6~8%)和脂类(8.5~13.5%)，真菌所具有的几丁质含量因种而异，甚至有的属含量为零。 8.1 细胞破碎原理 细胞壁结构分三层。最里层为葡聚糖层，构成细胞壁的刚性骨架，使细胞具有一定形状。葡聚糖的相对分子质量为240000，是分支多糖聚合物。外层是甘露聚糖层，也是分支糖聚合物。葡聚糖层与甘露聚糖层间靠中间的蛋白质交联起来，形成网状结构。近10%的甘露聚糖的侧链通过磷酸二酸醋键与磷酸连接。 同细菌细胞壁一样，酵母细胞壁破碎阻力决定于壁结构交联的紧密程度和厚度。 8.1 细胞破碎原理 三、霉菌细胞壁 霉菌细胞壁厚度为100~250nm，由多糖组成(80~90%)，其次含有较少蛋白质和脂类。除少数水生低等霉菌的细胞壁中含纤维素外，大多数霉菌的细胞壁由几丁质构成。它与纤维素结构很相似，只是每个葡萄糖上第二碳原子和乙酰氨基相连，而在纤维素结构中是与羟基相连。 由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 8.1 细胞破碎原理 细胞壁的组成及它们间相互关联程度，决定着细胞壁的形状和强度，这又是细胞破碎难易的主要因素。不同种细胞壁，组成和结构差异很大，这是由各自遗传信息、培养生长环境和菌龄决定的。 此外，霉菌的细胞壁结构还随培养过程中机械搅拌作用的强弱而变化。只有充分了解这些，才能根据实际情况，制定出简单、合理、经济的细胞破碎方案。 8.1 细胞破碎原理 四、细胞破碎和产物释放原理 细胞破碎，采用各种机械破碎法和化学破碎法，或二者结合。 机械破碎中，细胞所受机械作用力，主要有压缩力和剪切力。化学破碎，又称化学渗透，利用化学或生化试剂（酶）改变细胞壁或细胞膜的结构，增大胞内物质的溶解速率；或完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下使细胞膜破裂而释放胞内物质。 8.1 细胞破碎原理 8.2 细胞破碎方法 一、细胞破碎目的 微生物代谢产物大多分泌到胞外，如大多数小分子代谢物，部分酶蛋白等。 有些目标产物如大多数酶蛋白、脂类和部分抗生素等存在于胞内，需先进行细胞分离收集菌体或细胞后，进行细胞破碎，使目标产物选择性释放出来，然后进一步纯化。 二、细胞破碎方法分类 （一）机械法的作用机理及适应性 为粉碎微生物细胞，常选择机械方法。