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二、紫外可见光度计仪器 分光光度计分为单波长和双波长仪器。 1. 单波长分光光度计 单光束 双光束（空间分隔） 双光束（时间分隔） 特点： 因光束几乎同时通过样品池和参比池，因此可消除光源不稳产生的误差。 光源 检测器 单色器 单色器 切光器 吸收池 双波长分光光度计示意图 2. 双波长分光度计 通过切光器使两束不同波长的光交替通过吸收池，测得吸光度差?A。 ?SB1和?SB2分别为在?1和?2处的背景吸收，当?1和?2 相近时，背景吸收近似相等。二式相减，得 这表明，试样溶液浓度与两个波长处的吸光光差成正比。 特点：可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数光谱、不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空白溶液等产生的误差)、克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。 3. 分光光度计的校正 当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。 波长标度校正： 使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者均有其各自的特征吸收峰。 吸光度标度校正： 采用 K2CrO4 标准液校正（在25oC时，于不同波长处测定0.04000g/L的 KOH 溶液（0.05mol/L）的吸光度 A，调整光度计使其A 达到教材 P31 中表 2.1 所列的吸光度。 2.4 分析条件选择 一、仪器测量条件 由于光源不稳定性、读数不准等带来的误差。当分析高浓度的样品时，误差更大。 由L-B定律： 微分后得： 将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为?T 和 ?c，得 当相对误差 ?c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程b来控制A的读数在0.15~1.00范围内。 三、仪器测量条件 （一）入射光波长： ?max（提高测量灵敏度） （二）狭缝宽度：合适的狭缝宽度是以减小狭缝宽度时样品的吸光度不在增加为标准。 四、吸光度读数范围 二、反应条件选择 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 ? 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量： 配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格控制。 3. 溶液酸度：配位数和水解等与 pH 有关。 4. 显色时间、温度、放置时间等。 三、参比液选择 溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 2. 试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 3. 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。 (一) 显色剂用量 原则：过量、适量、定量 最佳显色剂用量可通过条件试验确定： A M N C (二)酸度 最佳酸度可通过条件试验确定。 A M N pH 四、干扰消除 1. 控制酸度： 配合物稳定性与pH有关，可以通过控制酸度提高反应选择性，副反应减少，而主反应进行完全。如在0.5MH2SO4介质中，双硫腙与Hg2+生成稳定有色配合物，而与Pb2+、Cu2+、Ni2+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。 2. 选择掩蔽剂 3. 合适测量波长 4. 干扰物分离 5. 导数光谱及双波长技术 * 第三章 紫外-可见分光光度法 (Ultraviolet and Visible Spectrophotometry, UV-Vis) ? 2.1 紫外-可见吸收光谱 2.2 吸收光谱的测量-----Lambert-Beer 定律 2.3 紫外-可见光度计仪器组成 2.4 分析条件选择 2.5 UV-Vis分光光度法的应用 UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160~780nm.